獲得免疫の成立過程におけるIL-7レセプターの機能

IL-7受体在获得性免疫建立过程中的作用

• 批准号: 15019046
• 负责人: 生田 宏一
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019046/
• 关键词: サイトカインレセプター; インターロイキン7; T細胞; T細胞抗原受容体; 転写

本研究の目的は、末梢T細胞がTCRからの刺激を受けた後にIL-7Rの発現が低下する分子機構を解明することにある。まず、脾臓T細胞を固相化抗CD3抗体で刺激すると、IL-7Rの発現は16時間後にほとんど消失したが、この時のIL-7Rα鎖mRNAのレベルも著減していた。以上の結果から、IL-7Rの発現が転写レベルで制御されることが明らかとなった。次に、マウスIL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター領域を解析した。全長cDNAの塩基配列から、IL-7Rα鎖遺伝子の転写が翻訳開始点の上流51bpと126bpの2カ所から開始することを確認した。マウスとヒトのIL-7Rα鎖遺伝子座の配列を比較すると、転写開始点の上流200bpの領域が高度に保存されていた。この領域には、Ikaros、PU.1、Runxの結合モチーフが保存されていた。また、マウスにはグルココルチコイド受容体(GR)の結合モチーフも存在した。次に、これらの領域をIL-7Rを発現しているプロB細胞株38B9に導入しレポーター法により解析すると、特異的な転写活性化能が検出された。さらに、この時、PU.1モチーフを破壊すると活性が10%減少し、GRモチーフを破壊すると44%減少した。逆に、IkarosとRunxのモチーフを破壊すると活性が上昇した。PU.1とGRモチーフをともに変異させると転写活性化能が完全に失われた。さらに、結合モチーフにこれらの転写因子が結合するかどうかをゲルシフト法により解析すると、38B9細胞の核抽出物の中にGRモチーフに結合する活性が検出され、この活性は抗GR抗体により消失した。一方、プロT細胞株KKFやT細胞株W14C17では、グルココルチコイド処理によりIL-7Rの発現が増強した。以上の結果から、IL-7Rα鎖遺伝子の転写を、PU.1とGRが正に、IkarosとRunxが負に調節することが示唆された。

The aim of this study was to elucidate the molecular mechanisms underlying IL-7R expression after TCR stimulation in peripheral T cells. The expression of IL-7R in T cells stimulated by immobilized anti-CD3 antibody disappeared after 16 hours, and the expression of IL-7R α-lock mRNA decreased after 16 hours. The above results show that IL-7R can be produced in a variety of ways. Next, the IL-7 α lock vector was analyzed. The nucleotide sequence of the full-length cDNA and the nucleotide sequence of the IL-7R α gene were confirmed at 51bp and 126bp upstream of the translation start point. The alignment of IL-7R α gene loci was compared, and the height of the region 200bp upstream of the start point was preserved. This domain is reserved for Ikaros, PU.1, Runx and other combinations. The combination of GR and GR exists. In addition, IL-7R was detected in the B cell line 38B9. The expression of IL-7R in the B cell line 38B9 was analyzed by PCR and the specific activity of IL-7R was detected. The activity of PU.1 decreased by 10% and GR decreased by 44% respectively. Ikaros and Runx are active. 1. The activity of the enzyme is completely lost. The binding activity of GR in nuclear extracts of 38B9 cells was detected and the activity of GR in anti-GR antibodies disappeared. The expression of IL-7R in KKF and W14C17 cells increased after treatment. The above results show that IL-7Rα gene expression, PU.1 and GR are positive and Ikaros and Runx are negative.

项目成果

Watanabe, N.: "Elimination of local macrophages in intestine prevents chronic colitis in interleukin-10 deficient mice."Dig.Dis.Sci.. 48. 408-418 (2003)

Watanabe, N.：“消除肠道中的局部巨噬细胞可预防白细胞介素 10 缺陷小鼠的慢性结肠炎。”Dig.Dis.Sci.. 48. 408-418 (2003)

Kim-Saijo, M.: "Generation of a transgenic animal model of hyperthyroid Graves' disease."Eur.J.Immunol.. 33. 2531-2538 (2003)

Kim-Saijo, M.：“甲状腺功能亢进格雷夫斯病转基因动物模型的生成。”Eur.J.Immunol.. 33. 2531-2538 (2003)