獲得免疫の成立過程におけるIL-7レセプターの機能

IL-7受体在获得性免疫建立过程中的作用

基本信息

批准号：
15019046
负责人：
生田宏一
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、末梢T細胞がTCRからの刺激を受けた後にIL-7Rの発現が低下する分子機構を解明することにある。まず、脾臓T細胞を固相化抗CD3抗体で刺激すると、IL-7Rの発現は16時間後にほとんど消失したが、この時のIL-7Rα鎖mRNAのレベルも著減していた。以上の結果から、IL-7Rの発現が転写レベルで制御されることが明らかとなった。次に、マウスIL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター領域を解析した。全長cDNAの塩基配列から、IL-7Rα鎖遺伝子の転写が翻訳開始点の上流51bpと126bpの2カ所から開始することを確認した。マウスとヒトのIL-7Rα鎖遺伝子座の配列を比較すると、転写開始点の上流200bpの領域が高度に保存されていた。この領域には、Ikaros、PU.1、Runxの結合モチーフが保存されていた。また、マウスにはグルココルチコイド受容体(GR)の結合モチーフも存在した。次に、これらの領域をIL-7Rを発現しているプロB細胞株38B9に導入しレポーター法により解析すると、特異的な転写活性化能が検出された。さらに、この時、PU.1モチーフを破壊すると活性が10%減少し、GRモチーフを破壊すると44%減少した。逆に、IkarosとRunxのモチーフを破壊すると活性が上昇した。PU.1とGRモチーフをともに変異させると転写活性化能が完全に失われた。さらに、結合モチーフにこれらの転写因子が結合するかどうかをゲルシフト法により解析すると、38B9細胞の核抽出物の中にGRモチーフに結合する活性が検出され、この活性は抗GR抗体により消失した。一方、プロT細胞株KKFやT細胞株W14C17では、グルココルチコイド処理によりIL-7Rの発現が増強した。以上の結果から、IL-7Rα鎖遺伝子の転写を、PU.1とGRが正に、IkarosとRunxが負に調節することが示唆された。

这项研究的目的是阐明周围T细胞在TCR刺激后降低IL-7R表达的分子机制。首先，当用固相抗CD3抗体刺激脾脏T细胞时，IL-7R的表达几乎在16小时后消失，但是此时IL-7Rα-链mRNA的水平也显着降低。以上结果表明，IL-7R表达在转录水平上受到调节。接下来，分析了小鼠IL-7Rα链基因的启动子区域。基于全长cDNA的核苷酸序列，证实了IL-7Rα链基因的转录开始于两个位置，51 bp和126 bp的翻译起始点上游。比较小鼠和人IL-7Rα链基因座的序列，转录起始的区域是高度保守的。该区域保留了Ikaros，PU.1和Runx的结合基序。小鼠还具有用于糖皮质激素受体（GR）的结合基序。接下来，将这些区域引入了表达IL-7R并通过报告基因分析的Prob细胞系38B9中，并检测到了特定的转录激活能力。此外，目前，PU.1基序的活性降低了10％，并破坏了GR基序减少了44％。相反，Ikaros和Runx图案的破坏增加了其活性。 PU.1和GR基序的突变完全失去了激活转录的能力。此外，在分析这些转录因子是否通过凝胶转移与结合基序结合时，在38B9细胞的核提取物中检测到与GR基序的活性结合，并且通过抗GR抗体消除了该活性。另一方面，在Pro-T细胞系KKF和T细胞系W14C17中，糖皮质激素治疗增强了IL-7R的表达。上述结果表明，PU.1和GR正阳性地调节IL-7Rα链基因的转录，而Ikaros和Runx受负调节。