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リンパ系前駆細胞の生成過程におけるIL-7レセプターの機能

IL-7受体在淋巴祖细胞生成过程中的作用

基本信息

批准号：
15039218
负责人：
生田宏一
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

リンパ系前駆細胞の生成過程におけるIL-7Rの機能を明らかにするために、IL-7Rの発現制御機構を解析した。まず、マウスIL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター領域を解析した。まず、翻訳開始点の上流46bpから130bpの問の複数の箇所から、転写が開始することを確認した。マウスとヒトの配列を比較すると、転写開始点の上流200bpの領域が高度に保存されており、造血細胞やリンパ系前駆細胞の発生に重要な働きをしているIkaros、PU.1、Runxの結合モチーフが存在した。さらに、プロモーターの上流約3.6kbに高度に保存された270bpの領域が存在し、この中にグルココルチコイド受容体(GR)の結合モチーフがあった。次に、レポーター法により転写活性化能を解析した。プロモーター領域をレポーター遺伝子に連結し未熟T細胞株KKFに導入すると、特異的な転写が検出された。この時、PU.1モチーフを破壊すると90%、Runxモチーフを破壊すると30%の活性が失われた。さらに、GRモチーフを含む上流領域を加えると、グルココルチコイドによる転写の増幅が見られ、GRモチーフを破壊したものでは増幅が消失した。また、グルココルチコイド刺激によりGRがモチーフに結合することを、ゲルシフト法とクロマチン免疫沈降法により確認した。以上の結果から、IL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター活性において、PU.1とRunxのモチーフが重要な働きをしていることが明らかとなった。さらに、GRが、上流に存在するグルココルチコイド応答性領域に結合し、プロモーターからの転写を増幅することが示された。

The function of IL-7R in the process of cell formation and the mechanism of IL-7R production were analyzed. IL-7 α is the key to the development of human beings. The upper 46bp of the translation start point and the upper 130bp of the translation start point are confirmed by a plurality of translation start points. The 200bp region upstream of the start point of the transcription is highly conserved, and the Ikaros, PU.1 and Runx binding sites are important for the development of hematopoietic cells. The upper stream of the protein is about 3.6 kb, and the highly conserved domain of 270bp exists. The middle stream of the protein is a combination of protein receptors (GR). Next, the method of writing activation energy analysis The introduction of immature T cell line KKF into the field and the development of specific T cell lines The activity of PU.1 is 90%, Runx is 30%. In addition to the above, the scope of the document is also increasing. The method of immuno-sedimentation is used to confirm the binding of the two proteins. The above results show that IL-7R α is the most important factor in the activity of IL-7R α, PU.1 and Runx. In addition, the GR and the upstream exist in the field of communication, and the increase in the amplitude of communication is indicated.