転写因子Ikarosによる胸線T細胞の細胞周期と細胞死の制御

转录因子 Ikaros 对胸腺 T 细胞的细胞周期和细胞死亡的控制

基本信息

批准号：
16026217
负责人：
生田宏一
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

インターロイキン7レセプター(IL-7R)は、初期リンパ球の増殖・生存を促すのみならず、抗原受容体遺伝子の組換えの誘導など、さまざまな分化シグナルを伝達している。胸腺T細胞は、DN段階を過ぎるとプレTCRからのシグナルによりIL-7Rの発現を特異的に失い、次のDP段階でTCRからのシグナルにより正(細胞周期)と負(細胞死)の選択を受ける。これは、細胞の生死がTCRの特異性で決定される時期において、余計な増殖・生存シグナルを入れるIL-7Rを積極的に遮断しているものと考えられる。そこで、IL-7Rの発現制御機構を解析した。まず、IL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター領域を解析した。マウスとヒトの配列を比較すると、転写開始点の上流200bpが高度に保存されており、Ikaros、PU.1、Runxの結合モチーフが存在した。さらに、プロモーターの上流約3.6kbに高度に保存された270bpの領域が存在し、グルココルチコイド受容体(GR)の結合モチーフがあった。次に、レポーター法により、プロモーター領域を未熟T細胞株KKFに導入すると、特異的な転写が検出された。PU.1モチーフとRunxモチーフを破壊すると、活性が顕著に減少した。さらに、上流領域を加えると、グルココルチコイドによる転写の増幅が見られ、GRモチーフを破壊したものでは消失した。また、KKF細胞をグルココルチコイドで処理をすると、GRが上流領域に結合することが確認された。以上の結果から、IL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター活性において、PU.1とRunxのモチーフが重要な働きをしていることが明らかとなった。さらに、GRが、上流に存在するグルココルチコイド応答性領域に結合し、プロモーターからの転写を増幅することが示された。

白介素7受体（IL-7R）不仅促进了早期淋巴细胞增殖和生存，而且还会传递各种分化信号，例如诱导抗原受体基因重组。胸腺T细胞特异性地通过从TN阶段的前TCR发出信号传导特异性失去了IL-7R的表达，在下一个DP阶段，它们通过TCR信号传导进行正（细胞周期）和阴性（细胞死亡）选择。这被认为是因为包含不必要的增殖和生存信号的IL-7R在细胞生命和死亡由TCR的特异性确定时被积极阻塞。因此，分析了IL-7R表达调节的机理。首先，分析了IL-7Rα链基因的启动子区域。比较小鼠和人类序列表明，转录起源上游的200 bp是高度保守的，具有Ikaros，pu.1和runx的结合基序。此外，在启动子上游约3.6 kb的高度保守的270 bp区域，糖皮质激素受体（GR）具有结合基序。接下来，当通过报告基因方法将启动子区域引入未成熟的T细胞系KKF中时，检测到了特定的转录。 PU.1和RUNX基序的破坏显着降低了活性。此外，当添加上游区域时，观察到糖皮质激素的转录扩增，并且丢失了GR基序。此外，已经证实，当用糖皮质激素处理KKF细胞时，GR结合到上游区域。以上结果表明，PU.1和RunX的基序在IL-7Rα链基因的启动子活性中起重要作用。此外，显示GR与上游糖皮质激素响应区域结合并放大了启动子的转录。