IL-7レセプターの発現制御による免疫監視システムの形成と維持機構

通过调节IL-7受体表达形成和维持免疫监视系统的机制

基本信息

批准号：
16043229
负责人：
生田宏一
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

T細胞はその分化過程において、2つの段階でIL-7レセプター(IL-7R)の発現を一時的に低下させる。第一は胸腺で正と負の選択がおこるDP段階で、第二は末梢で抗原特異的なクローン増幅が起こる活性化T細胞の段階である。いずれもTCRの親和性のみで細胞の反応性が決まる段階であり、余計な生存・増殖シグナルを入れる可能性のあるIL-7Rを積極的にシャットオフしていると考えられる。そこで、IL-7Rの発現制御機構を解析した。まず、脾臓T細胞を固相化抗CD3抗体で刺激すると、IL-7Rの発現は16時間後にほとんど消失したが、この時のIL-7Rα鎖mRNAのレベルも著減していた。この結果から、TCRシグナルによってIL-7Rの発現低下が誘導され、それが転写レベルで制御されることが明らかとなった。次に、IL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター領域を解析した。マウスとヒトの配列を比較すると、転写開始点の上流200bpが高度に保存されており、Ikaros、PU.1、Runxの結合モチーフが存在した。さらに、プロモーターの上流約3.6kbに高度に保存された270bpの領域が存在し、グルココルチコイド受容体(GR)の結合モチーフがあった。次に、レポーター法により、プロモーター領域を未熟T細胞株KKFに導入すると、特異的な転写が検出された。PU.1モチーフとRunxモチーフを破壊すると、活性が顕著に減少した。さらに、上流領域を加えると、グルココルチコイドによる転写の増幅が見られ、GRモチーフを破壊したものでは消失した。以上の結果から、IL-7Rα鎖遺伝子のプロモーター活性において、PU.1とRunxのモチーフが重要な働きをしているおことが明らかとなった。さらに、GRが、上流に存在するグルココルチコイド応答性領域に結合し、プロモーターからの転写を増幅することが示された。

在分化过程中，T细胞在两个阶段暂时减少IL-7受体（IL-7R）的表达。第一个是DP阶段，其中阳性和阴性选择发生在胸腺中，第二个是活化的T细胞中的阶段，其中抗原特异性克隆扩增发生在外周区域。在这两种情况下，细胞反应性都仅通过TCR亲和力确定，并且认为细胞被主动关闭IL-7R，这可能会导致不必要的生存和增殖信号。因此，分析了IL-7R表达调节的机理。首先，当用固相抗CD3抗体刺激脾脏T细胞时，IL-7R的表达几乎在16小时后消失，但是此时IL-7Rα-链mRNA的水平也显着降低。这些结果表明，TCR信号诱导IL-7R表达降低，该表达在转录水平上受到调节。接下来，分析了IL-7Rα链基因的启动子区域。比较小鼠和人类序列表明，转录起源上游的200 bp是高度保守的，具有Ikaros，pu.1和runx的结合基序。此外，在启动子上游约3.6 kb的高度保守的270 bp区域，糖皮质激素受体（GR）具有结合基序。接下来，当通过报告基因方法将启动子区域引入未成熟的T细胞系KKF中时，检测到了特定的转录。 PU.1和RUNX基序的破坏显着降低了活性。此外，当添加上游区域时，观察到糖皮质激素的转录扩增，并且丢失了GR基序。从上述结果中可以揭示出PU.1和Runx的基序在IL-7Rα链基因的启动子活性中起重要作用。此外，显示GR与上游糖皮质激素响应区域结合并放大了启动子的转录。