増殖因子シグナル伝達系におけるチロシンホスファターゼの機能に関する研究

酪氨酸磷酸酶在生长因子信号转导系统中的功能研究

• 批准号: 06281243
• 负责人: 的崎 尚
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06281243/
• 关键词: チロシンホスファターゼ; SH_2ドメイン; チロシンキナーゼ; Ras蛋白; 細胞増殖; 遺伝子ノックアウト

A.研究目的チロシンホスファターゼは、チロシンキナーゼ系を介した正常な細胞増殖や発癌過程に重要な調節的役割をはたしているものと考えられるが、未だその詳細は明らかでない。私達は、最近、src-homology2領域(SH2 domain)を有するPTPaseであるSAP-2のcDNAクローニングに成功しているが、SAP-2はSH2 domainを介してチロシンキナーゼ型受容体やその気質蛋白に結合し、作用することが想定される。本研究では、チロシンキナーゼ型増殖因子受容体の細胞内シグナル伝達機構における、SAP-2の生理機能を明らかにしようと計画した。B.方法と結果1.SAP-2のPTPase活性を消失させた変異型SAP-2cDNAを、インスリン受容体を過剰発現するCHO細胞にトランスフェクトした。PTPase活性-の細胞においては、インスリン刺激によるRasの活性化、およびMAPキナーゼの活性化が著名に抑制されていた。一方、インスリン刺激によるPI3キナーゼの活性化は、有意に変化していなかった。さらに、変異型SAP-2を過剰発現する細胞において、変異型SAP-2とのみ複合体を形成する分子量12OKのチロシンリン酸化蛋白を同定した。2.SAP-2遺伝子欠損マウスの作成に関しては、SAP-2ゲノムDNAを単離した後、これをneo耐性遺伝子、ジフテリア毒素遺伝子を含むターゲッテイング用ベクターに組み込み、現在、homologous recombinationを生じたクローンをサザン法にて選択中である。C.考察本研究により、SAP-2がインスリンのRas活性化に決定的な役割を果たしていることが明らかとなった。おそらく、インスリン以外の他の増殖因子のシグナル伝達においても、Ras活性化に働き、細胞増殖に対して促進的に作用するものと考えられる。次に、どのようなメカニズムを介してSAP-2がRasの活性化を刺激するかが興味深いが、私達は、変異型SAP-2とのみ複合体を形成する分子量120Kのチロシンリン酸化蛋白が、SAP-2の気質蛋白ではないかと想定している。即ち、変異型SAP-2はPTPase活性を有しない為、そのターゲット蛋白である120Kは強度にチロシンリン酸化され、且つ変異型SAP-2と複合体を形成するものと考えられる。120K蛋白の精製、およびcDNAクローニングにより、SAP-2のより詳細な作用機構が解明されるものと思われる。

a. The purpose of the study is to introduce the process of normal colonization of human cancer. the purpose of the study is to introduce the important factors in the process of normal colonization of human cancer. the purpose of the study is to determine whether it is important in the course of normal colonization. Recently, in the field of src-homology2 (SH2 domain), there have been many successful tests in the field of PTPase, SAP-2, cDNA, and SAP-2, which have been introduced in the field of SH2 domain, and the combination of protein and protein has been successfully introduced. In this study, the recipient of wild-type colonization factor was used in this study, and the physiological mechanism of SAP-2 was able to demonstrate the accuracy of the program. b. Methods the results showed that the activity of 1.SAP-2 PTPase disappeared and the receptor of CHO was found to be resistant to CHO. The activity of PTPase is known as inhibition, stimulation, activation of Ras, activation of MAP activity. On the other hand, one party is interested in stimulating PI3 activity and intentionally activating it. The molecular weight, molecular weight and acidified protein were determined by SAP-2, SAP-2, and SAP-2, respectively. After the 2.SAP-2 virus has been successfully made, the SAP-2 virus DNA has been isolated, the neo tolerance test has been detected, the neo tolerance test has been detected, and the toxin has been detected. Now, the homologous recombination system has been selected for the first time. c. The purpose of this study was to investigate the results of service cutting, which was determined by the activation of Ras. The results showed that there was no significant difference between the results of this study. In addition to the production of other factors, the activation of Ras, the promotion of colonization, and the promotion of colonization, the effects of other factors on the proliferation of cells were studied. The molecular weight of the complex is 120K, the molecular weight is 120K, the acidified protein is acidified, the SAP-2 protein is activated, the molecular weight is 120K, the protein is acidified, the protein is SAP-2, the protein is acidified, the protein is activated, and the molecular weight is 120K, the acidified protein is acidified, the protein is activated, and the molecular weight is 120K. That is to say, the activity of SAP-2 PTPase is sensitive, the strength of protein is 120K, the strength of protein is 120K, and the complex of SAP-2 is acidified, and the complex of DNA is formed. The 120K protein concentrate, the SAP-2 protein concentrate, the SAP-2 protein concentrate and the SAP-2 protein enzyme were used to explain the effect of protein 120K on the thinking of the target protein.