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細胞周期関連遺伝子の導入による放射線抵抗性がんの感受性機構

引入细胞周期相关基因的放射抗性癌症的敏感性机制

基本信息

批准号：
08266231
负责人：
宮越順二
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266231/
关键词：
ヒト脳腫瘍細胞 p16遺伝子遺伝子導入細胞周期放射線感受性

项目摘要

ヒト由来脳腫瘍細胞(T98、A1235)にp16cDNAを組み込んだ発現プラスミド(pOPMTS)をトランスフェクションし、G418にて選択し,T98から14個のクローン、A1235から20個のクローンを選んだ。これらのクローンからRNAおよびタンパクを抽出し、p16遺伝子の発現について、ノーザンおよびウエスタンブロットを用いて検索した。これらのクローンのうち、それぞれの細胞株からp16を発現している4クローンずつを実験に用いた。p16遺伝子導入により得られた計8つのクローンと親株(T98、A1235)およびベクター導入株(T‐V4、A‐V3)の放射線感受性を比較した場合、p16発現クローン全てにおいて、親株やベクター導入株に比べて放射線に感受性となった。対照のベクター導入株は親株と比較して放射線感受性に有意な差が見られなかった。フローサイトメトリーにより親株(A1235)、ベクター(A‐V3)およびp16遺伝子導入クローン(A‐C29)に関してフローサイトメトリーにより指数的増殖期における細胞周期分布を調べたところ、細胞株間における有意な差は見られなかった。次に、放射線照射後の細胞周期分布について解析した。3Gy照射後20および40時間後におけるDNAヒストグラムの結果、全てのクローンにおいてG1アレストならびにG2ブロックが見られた。とくにp16発現クローン(A‐C29)においてその効果は顕著であった。さらにp16発現クローンでは、放射線照射後、部分的なDNAのマイクロフラクションが観察された。このことは部分的なアポトーシスが起きていることを示唆している。本研究荷よって、p16遺伝子を欠失しているがん細胞への野性型p16遺伝子の導入により放射線感受性が高まることが示された。この効果は、放射線感受性の異なる親株で共に観察された。その作用機構についてはまだ明らかではないが、同様の結果を悪性黒色種細胞株でも得ている。p16導入クローン(A‐C29、T‐C12)におけるRbリン酸化抑制の顕著な効果は認められなかったが、DNAヒストグラムの結果から、放射線照射後少なくとも部分的なアポトーシスが引き起こされているように思われる。本研究の知見はp16タンパクが細胞の放射線感受性を支配している内因性因子の1つであることを示唆している。

The p16cDNA was cloned from tumor cells (T98, A1235) and identified by pOPMTS, G418,T98 and A1235. The expression of p16 gene was detected in the middle of the reaction. The cell line p16 was detected in the middle of the day and was used in the middle of the day p16 gene introduced into the plant was found to be more sensitive to radiation than parent plants (T98, A1235) and introduced plants (T-V4, A-V3). Comparison between introduced plants and their parents in radiation sensitivity The cell cycle distribution of the parent strain (A1235), the cell line (A-V3), and the p16 gene introduced into the parent strain (A-C29) is related to the growth period of the cell line index. Next, the analysis of cell cycle distribution after radiation exposure. After 20 to 40 hours of irradiation with 3Gy, the results of DNA sequencing were obtained, and the results of DNA sequencing were obtained. The effect of the explosion of the Kokoro Ne (A-C29) on the p16 is obvious. After radiation exposure, part of the DNA was detected. This is the first time I've ever seen a woman. In this study, the introduction of wild type p16 gene into cells with high radiosensitivity was demonstrated. This effect is observed in both parents with different radiation sensitivities. The mechanism of action of the black cell line is different from that of the black cell line. p16 introduced into the protein (A‐C29, T‐C12) caused by Rb protein acidification inhibition. The results of DNA sequencing showed that there was a small amount of DNA after radiation exposure. The results of this study suggest that p16 is an endogenous factor that controls cellular radiosensitivity.