細胞周期関連遺伝子の導入による放射線抵抗性がんの感受性化機構

引入细胞周期相关基因对放射抗性癌症的增敏机制

基本信息

  • 批准号:
    09255227
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.79万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1997 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ヒト由来脳腫瘍細胞(T98、A1235)にp16cDNAを組み込んだ発現プラスミド(pOPMTS)をトランスフェクションし、G418にて選択し,T98から14個のクローン、A1235から20個のクローンを選んだ。これらのクローンからRNAおよびタンパクを抽出し、P16遺伝子の発現について、ノーザンおよびウエスタンプロットを用いて検索した。これらのクローンのうち、それぞれの細胞株からp16を発現している4クローンずつを実験に用いた。p16遺伝子導入により得られた計8つのクローンと親株(T98、A1235)およびベクター導入株(T-V4、A-V3)の放射線感受性を比較した場合、p16発現クローン全てにおいて、親株やベクター導入株に比べて放射線に感受性となった。対照のベクター導入株は親株と比較して放射線感受性に有意な差が見られなかった。フローサイトメトリーにより親株(A1235)、ベクター導入株(A-V3)およびp16遺伝子導入クローン(A-C29)に関してフローサイトメトリーにより指数的増殖期における細胞周期分布を調べたところ、細胞株間における有意な差は見られなかった。次に、放射線照射後の細胞周期分布について解析した。3Gy照射後20および40時間後におけるDNAヒストグラムの結果、全てのクローンにおいてG1アレストならびにG2ブロックが見られた。とくにp16発現クローン(A-C29)においてその効果は顕著であった。さらに、16発現クローンでは、放射線照射後、部分的なDNAのマイクロフラクションが観察された。このことは部分的なアポトーシスが起きていることを示唆している。ヒトI-κBα/MAD3cDNAを発現ベクターpcDNA3に組み込んでI-κBαの発現プラスミドの作製を完了した。放射線抵抗性脳腫瘍細胞(MO54ならびにA172)にI-κBα発現プラスミドをトランスフェクションし、選択培地によりI-κBα発現クローンをチェックした。得られたI-κBα過剰発現クローンの放射線感受性を検索したところ、用いた2種の脳腫瘍細胞からの複数クローンにおいて放射線感受性が高まっていた。また、放射線感受性化の程度は、I-κBα過剰発現の程度にほほ比例していた。親株ならびにI-κBα発現クローンを用いて5Gy放射線照射後のNF-κBのDNA結合活性をelectrophoretic mobility shift assayにて調べたところ、親株では核分画におけるDNA/NF-κB複合体の増加が観察され、I-κBα発現クローンではこの複合体に変化は見られなかった。従って、この結果は、I-κBα発現クローンにおいて放射線照射後、NF-κBの核移行が阻害されていることを示している。
The p16cDNA was cloned from tumor cells (T98, A1235) and identified by pOPMTS, G418,T98 and A1235. The expression of P16 gene was detected in the middle of the reaction, and the expression of RNA was detected in the middle of the reaction. The cell line p16 was detected in the middle of the day and was used in the middle of the day p16 gene introduced into the plant was found to be more sensitive to radiation than parent plants (T98, A1235) and introduced plants (T-V4, A-V3). Comparison between introduced plants and their parents in radiation sensitivity The cell cycle distribution of the parent strain (A1235), the introduced strain (A-V3), and the p16 gene introduced strain (A-C29) is related to the growth period of the cell cycle index. Next, the analysis of cell cycle distribution after radiation exposure. After 20 to 40 hours of irradiation with 3Gy, the results of DNA sequencing were obtained, and the results of DNA sequencing were obtained. P16 is the first to appear on the screen (A-C29). After radiation exposure, part of the DNA was detected. This is the first time I've ever seen a woman. I-κBα/MAD3 cDNA development is complete. I-κ B α expression in radioresistant tumor cells (MO54 and A172) was detected in both cultures. The radiosensitivity of I-κBα was found to be higher in two kinds of tumor cells than in other kinds of tumor cells. The degree of radiosensitivity is proportional to the degree of I-κBα overexposure. DNA binding activity of NF-κB in parent plants after irradiation with 5Gy radiation was modulated by electrophoretic mobility shift assay. DNA/NF-κB complex was observed in parent plants after irradiation with 5Gy radiation. The results showed that I-κBα production was inhibited after radiation exposure, and NF-κB nuclear migration was inhibited.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Junji Miyakoshi: "Mutation Induction by high-density 50 Hz magnetic fields in human MeWo cells exposed in the DNA synthesizing phase." International Journal of Radiation Biology. 71. 75-79 (1997)
Junji Miyakoshi:“在 DNA 合成阶段暴露的人类 MeWo 细胞中,通过高密度 50 Hz 磁场诱导突变。”
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Nobuyuki Yamagishi: "Decrease in the freauency of x-ray-induced mutation by wild-type p53 protein in human osteosarcoma cells." Carcinogenesis. 18. 695-700 (1997)
Nobuyuki Yamagishi:“降低人骨肉瘤细胞中野生型 p53 蛋白 X 射线诱导突变的频率。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Junji Miyakoshi: "Increased radiosensitivity of p16 gene-deleted human glioma cells after transfection with wild-type p16gene." Japanese Journal of Cancer Research. 88. 34-38 (1997)
Junji Miyakoshi:“转染野生型 p16 基因后,p16 基因缺失的人神经胶质瘤细胞的放射敏感性增加。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Nobuyuki Yamagishi: "Enhanced rediosensitivity by inhibition of nuclear factor kB activation in human malignant glioma cells." International Journal of Radiation Biology.72. 157-162 (1997)
Nobuyuki Yamagishi:“通过抑制人类恶性神经胶质瘤细胞中核因子 kB 的激活来增强反应敏感性。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Junji Miyakoshi: "Suppression of high-density magnetic field(400 mT at 50 Hz)-induced mutations by wild-type p53 expression in human osteosarcoma cells." Biochemical and Biophysical Research Communications. (in press).
Junji Miyakoshi:“通过在人骨肉瘤细胞中表达野生型 p53 来抑制高密度磁场(400 mT,50 Hz)诱导的突变。”
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    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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