唾液腺癌のベスナリノンによる分化誘導療法に関する基礎的研究

维纳里酮分化诱导治疗唾液腺癌的基础研究

• 批准号: 11140250
• 负责人: 佐藤 光信
• 金额: $ 2.94万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140250/
• 关键词: 唾液腺癌; ベスナリノン; 分化誘導療法; TSC-22遺伝子; アポトーシス; 転写活性化能; 抗癌剤感受性; 放射線感受性

ヒト唾液腺癌細胞(TYS)を癌分化誘導剤ベスナリノン(3,4-dihydro-6[4-(3,4)-dimethoxbenzoyl-1-piperazinyl]-2(1H)-quinolinone)で処理して誘導される転写調節因子TSC-22の構造と機能を解析し、以下の諸点を明らかにした。1.TSC-22cDNAをアンチセンス・オリエントに組み込んだ発現ベクターを、リポフェクチン試薬を用いてTYS細胞に導入すると、in vitro,in vivoでの細胞増殖は著明に促進した。2.Green Fluorescent Protein遺伝子を有するベクター(pEGFP-C3)にヒトTSC-22遺伝子を挿入して、TYS細胞にトランスフェクションした。その結果、TSC-22-GFPタンパクの過剰発現は、抗癌剤(5-Fu,CDDP,BLM)及び放射線の感受性を増強した。この場合、アポトーシスが誘導され、TSC-22-GFP融合タンパクは、細胞質から核へtranslocationした。3.酵母転写因子(GAL4)のDNA結合領域(GAL4BD)の認識配列であるUAS配列の下流にレポーター遺伝子として、β-galactosidase遺伝子(LacZ)及びヒスチジン合成酵素遺伝子(HIS3)を有するホスト酵母YRG-2を、pBD-TSC-22にて形質転換した。この形質転換酵母は、SD-agar-TRP(-)-HIS(-)培地上では増殖を示さなかった。すなわち、TSC-22は酵母の系において転写活性化能が認められなかった。次に、レポーターとして、UAS配列の下流にルシフェラーゼ遺伝子を有するプラスミド(pFR-Luc)を用いて、GAL4BDとTSC-22との融合タンパクを哺乳動物の細胞において発現するベクターpBK-TSC-22とを、TYS細胞、HSG細胞、HeLa細胞にトランスフェクションした。その結果、TSC-22は転写活性化能を示さなかった。4.酵母two-hybrid法により、TSC-22結合タンパクについて検索した。pBD-TSC-22をbaitとして用い、pGAD10-human fetal brain cDNAライブラリーをpreyとして用いて、ホスト酵母YRG-2に導入し、その形質転換体をアミノ酸要求性及びβ-galactosidase assayによってスクリーニングを行った。その結果、β-galactosidase陽性クローンを得た。5.TYS細胞をベスナリノンで処理すると、p53のdown-regulationとp21WAF1及びp27kip1並びにTGF-β1のup-regulationをNorthern blotting及びWestern blottinjgにより検出し、TYS細胞の分化・アポトーシスとの関連性が示唆された。

The structure and function of TSC-22, a regulatory factor for salivary gland carcinoma cells (TYS) induced by treatment with 3,4-dihydro-6[4-(3,4)-dimethoxbenzoyl-1-piperazinyl]-2 (1H)-quinolin, were analyzed. 1. The TSC-22cDNA was introduced into TYS cells in vitro and in vivo to promote cell proliferation. 2. Green Fluorescent Protein Gene Expression (pEGFP-C3) and TSC-22 Gene Expression in TYS Cells The results showed that TSC-22-GFP was found to be more sensitive to anti-cancer agents (5-Fu,CDDP,BLM) and radiation. In this case, TSC-22-GFP fusion is induced, and the cytoplasm is separated from the nucleus. 3. The DNA binding domain (GAL4BD) of yeast transcription factor (GAL4) is recognized as a downstream gene of UAS alignment, a β-galactosidase gene (LacZ), and a β-galactosidase synthase gene (HIS3), which are expressed in yeast YRG-2 and pBD-TSC-22. Yeast, SD-agar-TRP(-)-HIS(-) culture medium TSC-22 is a yeast strain that can be activated by enzyme. The fusion of GAL4 BD and TSC-22 was developed in mammalian cells, including pBK-TSC-22, TYS cells, HSG cells and HeLa cells. TSC-22 is an active material. 4. Yeast two-hybrid method, TSC-22 combined with TSC-22 pBD-TSC-22 is baited and pGAD10-human fetal brain cDNA is introduced into yeast YRG-2. All morphological changes are required for acid and β-galactosidase assay. Results: β-galactosidase positive. 5. TYS cell differentiation, down-regulation of p53, up-regulation of p21 WAF1 and p27 kip1, and up-regulation of TGF-β1, Northern blotting and Western blotting were detected.

项目成果

Masato Okamoto: "Liposome-incorporated interferon-γ-inducing molecule derived from OK-432, a streptococcal preparation"J.Immunother.. (in press). (1999)

Masato Okamoto：“源自链球菌制剂 OK-432 的脂质体掺入干扰素-γ-诱导分子”J.Immunother..（出版中）。

Hitoshi Kawamata: "Haematogenous cytokeratin 20 mRNA as a predictive marker for recurrence in oral cancer patients"Brit.J Cancer. 80(3/4). 448-452 (1999)

Hitoshi Kawamata：“血源性细胞角蛋白 20 mRNA 作为口腔癌患者复发的预测标记”Brit.J Cancer。

Hitoshi Tsujimoto: "Effect of epidermal growth factor administration on the development of mouse salivary gland carcinomas."J.Oral Pathol.Med.. 28(1). 30-36 (1999)

Hitoshi Tsujimoto：“表皮生长因子给药对小鼠唾液腺癌发展的影响。”J.Oral Pathol.Med. 28(1)。

Masayuki Azuma: "TGF-β1 inhibits NF-kB activity through induction of IkB-α expression in human salivary gland cells : A possible mechanism of growth suppression"Exp.Cell Res.. 250(1). 213-222 (1999)

Masayuki Azuma：“TGF-β1 通过诱导人唾液腺细胞中的 IkB-α 表达来抑制 NF-kB 活性：生长抑制的可能机制”Exp.Cell Res. 250(1) (1999)。

Hitoshi Kawamata: "Balance between activated-STAT and MAP kinase regulates the growth of human bladder cell lines after treatment with epidermal growth"Int.J.Oncol.. 15(3). 661-667 (1999)

Hitoshi Kawamata：“活化 STAT 和 MAP 激酶之间的平衡在表皮生长治疗后调节人膀胱细胞系的生长”Int.J.Oncol.. 15(3)。