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G蛋白質によるPLC活性化機構の解析

G蛋白激活PLC机制分析

基本信息

批准号：
07256214
负责人：
本間好
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.PLCδに結合する新規タンパク質として新規にクローニングしたp122に関して以下のことが判明した。i)p122はRhoのみならずCdc42Hsに対してもGAP活性を示すこと(RhoA>Cdc42Hs>>Racl)、i)p122は精製PLCδ1のPIP_2水解活性を強く促進するが、PLCβ1、PLCγ1、PLCγ2に対する活性促進効果は小さいこと、ii)PLCδ1の活性促進にはGAPドメイン近傍の領域が必要であること。これらの結果より、p122がPLCδ1の驚異的な活性化因子であることが明らかになった。また、p122がRhoまたはCdc42Hsの下流に存在しPLCδ1にシグナルを伝える可能性が示唆された。2.生理的条件下でp122によるPLCδ1の活性化が惹起される可能性について検討し、次のような結果が得られた。i)p122-過剰発現COS細胞においてはp122-PLCδ1の分子会合が観察されたが、過剰発現の認められない3Y1、MDBK、PC12、Raji細胞等では観察されないこと、i)GST-p122を用いた結合実験よりp122とPLCδ1の2分子の結合が極めて弱いこと(約1/50の結合比)、ii)p122-過剰発現COS細胞のIP_3レベルはコントロール細胞のそれに比して有意に高いこと。以上の結果は、p122-PLCδ1の相互作用が1:1の直接的な関係でない可能性を示している。3.一方、GST-p122を用いた結合実験よりp122に特異的に強く結合する分子が複数存在することが判明した。特異的なp122結合タンパク質としては64kDa、55kDa、27kDaの分子が挙げられる。4.以上の結果は、細胞内ではp122が第三の因子を介してPLCδ1の活性化因子として機能する可能性を示している。さらに、これらの研究成果はGタンパク質を介した新しいPLC活性化経路につながる。

1. PLC δ is combined with the new rules of the new rules and the quality of the new rules. The new rules of the new rules are as follows. i)p122はRhoのみならずCdc42Hsに対してもGAP active display (RhoA>Cdc42Hs>>Racl), i)p122はRefined PLCδ1のPIP_2 hydrolysis The activity is strong and the activity promotion effect of PLCβ1, PLCγ1 and PLCγ2 is small.さいこと, ii) PLCδ1 activity promotion にはGAP ドメインnear the area がnecessary であること. The result of これらのより, the surprising な activating factor of p122がPLCδ1 であることが明らかになった.また、p122がRhoまたはCdc42Hsのdegradable existenceしPLCδ1にシグナルを伝えるpossibilityがshows instigationされた. 2. Under physiological conditions, the activation of p122 PLCδ1 causes the possibility of activation and the result of activation. i) p122 - 性剰発 appear COS cell においてはp122-PLCδ1 molecule convergence が観看されたが、国剰発appearのcognize められない3Y1, MDBK, PC12, Raji cells, etc. では観看されないこと, i)GST-p12 2をUsing the combination of いた実験よりp122とPLCδ1の2 molecules and the のpolar めてweak いこと (about 1/50のbinding ratio), ii)p122-The IP_3 of COS cells has been shown to be high. The above results indicate that the direct relationship between p122-PLCδ1 and p122-PLCδ1 is 1:1, indicating the possibility of it. 3. On the one hand, it is clear that the specific strong binding molecules of GST-p122 exist in plural. Specific nap122 binds to the タンパク性としては64kDa, 55kDa, and 27kDa molecules がげられる. 4. The above results show the possibility of the function of the third factor and the activation factor of PLCδ1 in the cell.さらに、これらのResearch resultsはGタンパク性を中した新しいPLC activated経路につながる.