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G蛋白質によるPLC活性化機構の解析

G蛋白激活PLC机制分析

基本信息

批准号：
06264217
负责人：
本間好
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

各種受容体刺激に伴いイノシトールリン脂質ホスホリパーゼC(PLC)が活性化され、細胞内セカンドメッセンジャーが産生される。PLC分子種として3種のサブタイプ(PLCβ、PLCγ、PLCδ)が報告されているが、これらPLCの活性化過程にG蛋白質が関与することが知られている。本研究では、ヒト白血病細胞HL-60細胞のレチノン酸による細胞分化を解析モデルとして用い、次のことを明らかにした。i)分化型HL-60の細胞膜画分よりGi2を精製するとPLCβ3が共に精製され、さらにこの標品にGTPγSを添加することによりPLCβ2の活性化が観察できること、ii)ウシ脳より別途精製したGi2βγサブユニットとPLCβ2を用いて試験管内での再構成が可能であること、iii)分化型HL-60より精製したGi2βγはPLCβ2を活性化するが、未分化型細胞より精製したGi2βγはその活性化能が極めて低いこと、iv)分化型HL-60のGi2βγ分子種として主なものはβ1γ2であり、未分化型のβ1γ5と異なること、等である。これらの結果は、βγ分子種の違いによりPLCβ2の活性化能が異なる可能性を示している。一方これとは別に、PLCδに結合する新規タンパク質p122をクローニングすることに成功した。その機能解析の結果、p122はPLCδを特異的に活性化するばかりか、低分子量Gタンパク質Rhoに対するGAP(GTPase-activating protein)活性を併せ持つことが判明した。この結果は、調節メカニズムや機能が明らかにされていないPLCδ経路にもGタンパク質が関与する可能性を示している。

A variety of receptors stimulate the activation of lipid molecules C(PLC) and intracellular lipid molecules. PLC molecular species and three kinds of proteins (PLCβ, PLCγ, PLCδ) are reported to be involved in the activation process of PLC G protein. In this study, we analyzed the cellular differentiation of HL-60 leukemia cells. i) Cell membrane fractionation of differentiated HL-60: purification of Gi2; ii) purification of Gi2 β γ; iii) activation of PLCβ2; iii) purification of differentiated HL-60: purification of Gi2 β γ; Undifferentiated cells are characterized by high activity of Gi2βγ, low activity of Gi2βγ, and low activity of Gi2βγ. Undifferentiated HL-60 is characterized by high activity of Gi2βγ and high activity of Gi 2 β γ. These results indicate the possibility of different activation energies of PLCβ2 due to the presence of βγ molecular species. A party to the new regulations, PLC delta, the quality of the p122, the success of the The results of functional analysis showed that p122 was activated by PLCδ-specific protein, and GAP(GTPase-activating protein) activity was maintained by low molecular weight GTPase-activating protein. The results show the possibility of adjusting the quality of the PLC delta circuit.