基本転写因子の機能と転写制御機構

转录因子的基本功能和转录控制机制

基本信息

批准号：
07258220
负责人：
北嶋繁孝
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)転写因子TFIIFは、RNAポリメラーゼIIによる転写開始とmRNA合成の伸長反応に関与する生物にとって必須な転写因子である。TFIIFはRAP30とRAP74とのヘテロテトラマ-である。TFIIFの構造生物学を目的に現在その高次構造の解析を進めているが、今回、昆虫細胞に発現させたリコンビナントIIFを用いてトリプシンによる限定分解を行なった。その結果、RAP74はRAP30より強いトリプシン感受性を示し、おそらくRAP30は内側に存在し、RAP74は外側に配位していることを疑わせた。さらに、RAP74の分解はセントラル領域と呼ばれるチャージに富むドメインがきわめて分解されやすく、N-,C-未領域はトリプシンに抵抗性を示した。このことから、RAP74はN-,C-末でグロブユラ-な構造をとっており、その間の領域は確かな構造をとらず、タンパクの外面を向いていることを示唆した。また、TBP,IIB,PolIIとプロモーターDNAとでDBPolF複合体を作らせたとき、RAP30はトリプシン消化から保護されたが、RAP74のセントラルドメインの分解には変化がなかった。これまでに、RAP74のこの領域は種々のリン酸化を受けやすい事、SRFなどの転写制御因子との作用部位であることがわかっている。この知見は高次構造の理解に参考になると思われる。2)細胞周期でPolII基本転写活性が変化することを見いだした。結果は、PolIIインヴィトロ転写活性が、S/G2期で低く初期G1期で高いことがわかった。この違いは、TFIID活性によってもたらされるが、TBPの発現量には変化がなく、また、S/G2期に転写のレプレッサーが存在するということもなかった。TFIIDはTBP/TAFから構成されるので、細胞周期でのTFIID活性の変動はTAFによって制御されているのかも知れない。一方、PolIII因子であるTFIIIB(sBPとPolIIITAFとで構成される)についても細胞周期M期で活性が低下することが報告され、TBPとTAFの複合体の制御の可能性が強く示唆される。

1）转录因子TFIIF是RNA聚合酶II启动转录和mRNA合成的伸长反应的生物的必不可少的转录因子。 TFIIF是Rap30和Rap74的异驱量。我们目前正在以结构生物学的目的分析TFIIF的高阶结构，如今我们使用胰蛋白酶使用在昆虫细胞中表达的重组IIF进行了有限的降解。结果，Rap74比Rap30表现出更大的胰蛋白酶敏感性，这可能引起怀疑Rap30是内部的，Rap74在外部进行了协调。此外，Rap74的降解非常容易降解，称为中央区域的电荷富含域，而N-，C-非区域对胰蛋白酶具有抵抗力。这表明Rap74在N-和C端具有球形结构，并且它们之间的区域没有固体结构，并且面向蛋白质的外表面。此外，当用TBP，IIB，Polii和启动子DNA制成DBPOLF综合体时，Rap30免受胰蛋白酶消化的保护，但Rap74中心域的降解没有变化。迄今为止，已经发现Rap74的该区域容易受到各种磷酸化的影响，并且是转录调节剂（例如SRF）的作用部位。这一发现似乎在理解高阶结构方面很有用。 2）我们发现polii基础转录活性在细胞周期中变化。结果表明，在S/G2期，Polii体外转录活性在S/G1早期较高。这种差异是由TFIID活性引起的，但是TBP的表达水平没有变化，并且在S/G2相中不存在转录阻遏物。由于TFIID由TBP/TAF组成，因此TAF可以控制细胞周期中TFIID活性的波动。另一方面，TFIIIB（由SBP和PoliiItaf组成）TFIIIB也据报道在细胞周期的M期间的活性降低，强烈表明它可以由TBP和TAF复合物调节。