基本転写因子の機能と転写制御機構

转录因子的基本功能和转录控制机制

• 批准号: 05273205
• 负责人: 北嶋 繁孝
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05273205/
• 关键词: 基本転写因子TFIIF; 転写開始; mRNA伸長; リン酸化; PolII結合; ハイブリッドIIF; DBPolF複合体

我々は、これまでにヒト基本転写因子TFIIFのcDNAクローニングによる一次構造の解析、更にはdeletion mutantを用いたTFIIF活性ドメインの解析を行なってきた(Yonaha et al.NAR 21:273-279,1993)。当該年度において、次の点を明かにした。HeLa TFIIFをin vitroでアルカリフォスファターゼ処理すると、RAP74は、SDS-PAGE上、大腸菌で発現させたRAP74(r74)と同じsizeになり、RAP30には変化がなかった。この脱リン酸化型のIIFは、in vitro転写活性およびmRNA伸長促進活性が低下しており、これは、RNA polymeraseIIとの結合活性が低下するためであった。TFIIFは、large subunit(RAP74)とsmall subunit(RAP30)とからなるheteromerであるため、どちらのsubunitの脱リン酸化がこれらの効果をもたらすかを,nativeなサブユニットとrecombinantなサブユニットとをもちいて、それぞれ等モルの条件でハイブリットIIFを作製することで解析した。その転写開始活性は、nativeどうしのハイブリットが最も高い活性を示し、recombinant IIFは10-20%の低い活性であった。一方、nativeとrecombinantとのハイブリットであるn30/r74は、recombinant IIFと同レベルの低い活性であったが、r30/n74の組み合わせでは、native IIFに匹敵する効率良い活性が再構成された。また、minimal promoter sequenceと、TBP,IIB,IIF,PolIIで形成される転写開始複合体(DBPolF複合体)をnative gel electrophoresisで測定したところ、脱リン酸化IIFは、その形成能を低下させること、ハイブリットIIFのうちr30/n74は、n30/n74に相当する活性を示すがn30/r74はrIIF同様の低い活性しか示さなかった。これらの結果はsuboptimalな量のIIFで認められ、saturateした量では差がなかった。以上のことから、非修飾型IIFは、転写開始、mRNA伸長促進、DBPolF複合体形成の活性をもつが、その強さは、翻訳後修飾によって制御されることがわかった。特に、RAP74のリン酸化は、TFIIF活性をup-regulateすることがわかった。一方、RAP30はin vivoでリン酸化されているが、その意義については明かにできていない。しかしながら、rIIFも、飽和量を用いると十分なDBPolFをつくることから、RAP30のPolII結合にはその修飾は必須でないと考えられた(Kitajima,S.et al.manuscript in preparation.)。

I 々 は, こ れ ま で に ヒ ト basic planning write factor TFIIF の cDNA ク ロ ー ニ ン グ に よ る a tectonic の parsing, more に は deletion mutant を with い た TFIIF active ド メ イ ン の parsing line を な っ て き た (Yonaha et al. The NAR 21:273-279,1993. When the year にお にお て and the next <s:1> point を are に に た. HeLa TFIIF を in vitro で ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ 処 Richard す る と, RAP74 は, sds-page, coliform で 発 now さ せ た RAP74 (r74) と じ size に な り, RAP30 に は variations change が な か っ た. Type こ の リ off ン acidification の IIF は, the in vitro activity planning write お よ び mRNA low elongation promote active が し て お り, こ れ は, RNA polymeraseII と の combined with low activity が す る た め で あ っ た. TFIIF, large subunit(RAP74)とsmall Subunit (RAP30) と か ら な る heteromer で あ る た め, ど ち ら の subunit の リ off ン acidification が こ れ ら の unseen fruit を も た ら す か を, native な サ ブ ユ ニ ッ ト と recombinant な サ ブ ユ ニ ッ ト と を も ち い て, そ れ ぞ れ etc モ ル の conditions で ハ イ ブ リ Youdaoplaceholder0 IIFを production する する とで analysis た. そ の planning to write start active は, native ど う し の ハ イ ブ リ ッ ト が も most high い activity を し, recombinant IIF は 10-20% low の い active で あ っ た. Side, the native と recombinant と の ハ イ ブ リ ッ ト で あ る n30 / r74 は, recombinant IIF と with レ ベ ル の low い active で あ っ た が, r30 / n74 の group み close わ せ で は, native IIF に match す る sharper rate good い active が reconstitution さ れ た. Youdaoplaceholder0, minimal promoter sequenceと, TBP,IIB,IIF,PolIIで form される転 write start complex (DBPolF complex)をnative gel Determination of electrophoresis で し た と こ ろ, リ ン acidification IIF は, そ の can form low を さ せ る こ と, ハ イ ブ リ ッ ト IIF の う ち r30 / n74 は, n30 / n74 に quite す る active を shown す が n30 / r74 は rIIF with others in low の い active し か shown さ な か っ た. The <s:1> れら <s:1> result shows that the <s:1> suboptimalな quantity <e:1> IIFで is the められ and the saturate <s:1> た quantity で で is different がな められ った った った. Above の こ と か ら, non modified IIF は, planning began writing, mRNA elongation promote, DBPolF complex formation の active を も つ が, そ の strong さ は, modification after turn 訳 に よ っ て suppression さ れ る こ と が わ か っ た. Special に, RAP74 リ <s:1> acidification, TFIIF activity をup-regulateする った とがわ った った. One party, RAP30 は in vivo で リ ン acidification さ れ て い る が, そ の meaning に つ い て は Ming か に で き て い な い. し か し な が ら, rIIF も, saturation of を with い る と very な DBPolF を つ く る こ と か ら, RAP30 の PolII combining に は そ の must modify は で な い と exam え ら れ た (Kitajima, S.e t al. Tokyo-based manuscript preparation in.).

项目成果

Yonaha,M.et al: "Domain structure of a human general transcription initiation factor TFIIF" Nucleic Acids Research. 21. 273-279 (1993)

Yonaha,M.et al：“人类通用转录起始因子 TFIIF 的结构域”核酸研究。

Aso,T.et al: "Characterization of cDNA for the large submit of the transcription initiation factor TFIIF" Nature. 355. 461-464 (1992)

Aso，T.et al：“转录起始因子 TFIIF 的大量提交的 cDNA 的表征”Nature。

Kobayashi,Y.et al: "Isolation and nucleotide sequence of α rat cDNA homologous to human RAP30" Nucleic Acids Research. 20. 1994 (1992)

Kobayashi, Y. 等人：“与人 RAP30 同源的 α 大鼠 cDNA 的分离和核苷酸序列”核酸研究，1994 年 20 月 (1992)。

Aso,T.et al: "Assignment of the human GTF2 gene to chromosome 19p13.3" Genomics. 16. 252-254 (1993)

Aso,T.et al：“将人类 GTF2 基因分配到染色体 19p13.3”基因组学。