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サイクリンD1の心筋特異的核内発現によるヒト心筋細胞再生法の開発

利用心肌特异性细胞核表达细胞周期蛋白D1开发人心肌细胞再生方法

基本信息

批准号：
17659230
负责人：
北嶋繁孝
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題は、我々が新生児ラット心筋を用いて見出した心筋再分裂誘導法を応用して、成人ラットさらにはヒト心筋の再分裂法を確立することである。その目的のために、まず成獣ラット心筋の単離と培養法を確立した。6週齢ラットの心筋をコラゲナーゼ処理し心筋を組織から分離し、次いで血清なしの条件で48時間培養することで、混入した線維芽細胞を極力抑えた成獣ラット心筋を得た。この培養心筋に、我々が開発したサイクリン核内発現ベクターとp27分解E3リガーゼSkp2発現ベクターを用いることにより、細胞分裂誘導に成功した。すなわち、細胞分裂マーカーであるKi67,リン酸化型ヒネトンH3を検出できた。さらに、成獣ラットの虚血個体心筋モデルを用いて、本法が確かに心筋の分裂を誘導できることを確認した。特筆すべきは、細胞周期の染色体分裂期のM期の各相に相当する細胞を検出できかつ細胞質分裂後の細胞も同定できたことから、我々の方法が完全な終末分化段階にある成獣ラット心筋細胞の細胞周期を完全に回すことに有効であることが示されたことである。さらに、単離した心筋単一細胞のmRNAの解析を行い、細胞周期関連遺伝子の発現を確認できた。実験材料として制限される心筋細胞の解析にゲノミックス解析が有用であることが強く示唆される。本研究期間中、外科手術標品由来のヒト心筋材料を得るチャンスがなく、ヒト心筋研究は行うことが出来なかったが、凍結保存したヒト心室心筋細胞を米国より入手し本試料を用いた細胞分裂再誘導を行い、我々の方法がヒトにおいても有効である結果を得つつある。以上、細胞周期のアクセル分子の核内発現と抑制因子の特異的なプロテアソーム依存性分解を組み合わせることにより、完全に終末分化した成人心筋細胞の分裂誘導法を確立できた。特発性心筋症など重症心不全の再生医学に向けた再生医学の基礎になる結果を得た。

The subject of this research is the re-dividing induction method of the new heart muscle that I have used as the new heart muscle. The を応用して, the adult ラットさらにはヒト心丝のre-splitting method をestablished することである.そのpurposeのために、まず成獣ラット心丝の単里と文化法をEstablishmentした. 6 weeks of 齢ラットの心素をコラゲナーゼtreatmentし心丝を tissueからseparationし、SEいでSerumなしの strips It takes 48 hours to culture the cells and mix them with fibroblast cells to suppress the growth of the heart muscle.このDevelop the heart muscle に、我々が开発したサイクリン内発appear ベクターとp27 decomposition E3いることにより、Cell division induction was successfulした.すなわち, cell division マーカーであるKi67, リン acidified ヒネトンH3を検出できた.さらに, 成獣ラットのdeficiency individual heart muscle モデルを use いて, this method is confirmed がかにcardio の split を induction できることをconfirmation した. Special strokes, the chromosome division phase of the cell cycle, the M phase of the cell cycle, the phase of each phase, the equivalent of the cell, the cell after the cytoplasm division, the same set of cells, My method is to complete the terminal differentiation stage of the cell cycle of cardiac muscle cells and to be effective and efficient.さらに, 単里した心丝　　　 mRNA ANALYSIS を行い, 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 targetedtrap in a single cell の獘 ANALYSIS を line い実験 Materials としてされるの ANALYSIS にゲノミックス ANALYSIS がでることが STRONG く INDICATION される. During the period of this study, the standard materials for middle and surgical procedures were obtained: the origin of the heart muscle material, the heart muscle research, the heart muscle research, the heart muscle research, the heart muscle material, the heart muscle research, the heart muscle research, the heart muscle material, the heart muscle research, the heart muscle material, the frozen preservation method. The ventricular myocardial cells were obtained by using the method of re-inducing the cell division and re-induction of this sample. The method was effective and the results were obtained. The above is the breakdown of the dependence of the specific nucleic acid inhibitors on the nuclear expression and inhibitory factors of the cell cycle molecule. The division induction method of adult myocardial cells has been established since the establishment of the method of inducing complete terminal differentiation of adult myocardial cells. The basics of regenerative medicine for idiopathic cardiomyopathy, severe heart insufficiency, and the results of regenerative medicine have been obtained.

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A splice variant of stress response gene ATF3 counteracts NF-kB-dependent anti-apoptosis through inhibiting recruitment of CBP/p300 co-activator.

应激反应基因 ATF3 的剪接变体通过抑制 CBP/p300 共激活因子的募集来抵消 NF-kB 依赖性抗凋亡作用。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Journal of Biological Chemistry 281
影响因子：
0
作者：
Hua B et al.
通讯作者：
Hua B et al.

Induction of apoptosis and cellular senescence in mice lacking transcription elongation factor, Elongin A

DOI：
10.1038/sj.cdd.4402067
发表时间：
2007-04-01
期刊：
CELL DEATH AND DIFFERENTIATION
影响因子：
12.4
作者：
Miyata, K.;Yasukawa, T.;Aso, T.
通讯作者：
Aso, T.

ATF3 and EGR1 are novel targets of LY294002 in a PI3K-independent pathway

ATF3 和 EGR1 是 LY294002 在 PI3K 独立通路中的新靶标

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Cancer Research 66
影响因子：
0
作者：
Hua B et al.;Yamaguchi K. et al.;Miyata K. et al.;Yasukawa T. et al.;Hua B et al.;Yamaguchi K et al.
通讯作者：
Yamaguchi K et al.

Activating transcription factor 3 and early growth response-1 are the novel targets of LY294002 in a PI3K independent pathway

激活转录因子 3 和早期生长反应 1 是 LY294002 在 PI3K 独立途径中的新靶标

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Cancer Research 66
影响因子：
0
作者：
Hua B et al.;Yamaguchi K. et al.
通讯作者：
Yamaguchi K. et al.

A splice variant of stress response gene ATF3 counteracts NF-kB-dependent anti-apoptosis through inhibiting recruitment of CBP/p300 coactivator

应激反应基因 ATF3 的剪接变体通过抑制 CBP/p300 共激活因子的募集来抵消 NF-kB 依赖性抗凋亡

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Journal of Biological Chemistry 281
影响因子：
0
作者：
Hua B et al.;Yamaguchi K. et al.;Miyata K. et al.;Yasukawa T. et al.;Hua B et al.
通讯作者：
Hua B et al.