転写因子TFIIFの伸長因子としての機能解析

转录因子TFIIF作为延伸因子的功能分析

• 批准号: 10173210
• 负责人: 北嶋 繁孝
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10173210/
• 关键词: 転写伸長因子; TFIIF; トリプシン分解; 3極構造; 開始型; 伸長型

1。 TFIIF機能の解析(1)TFIIFサブユニットRAP30.74のバキュロウイルス発現系を用いて、昆虫細胞で同時に感染させることにより両サブユニットが等モル比で会合したIIFを作製した。一方、他の基本因子(ヒトTBP,IIB,IIE)のリコンビナント型、ラットIIH.ヒトRNAポリメラーゼIIを精製し、これらによるin vitro転写活性を再構成した。次に、アデノウイルス主要後期遺伝子の最小プロモーターDNAを用いて、"開始型"IIFモデルを作製した。同時にIIF単独"遊離型IIF"、IIF/PolII/DNA複合体"伸長型IIF"を含めてトリプシン消化によるIIF構造の解析を行った。RAP74は、N-末約20K,C-末15Kほどの球状ドメイン、その間のチャージに富む中央ドメインは高いトリプシン感受性を持つランダム構造をとり、3極(Tripartite)構造をもつことがわかった。RAP30は、74分解後に約14Kの断片に切断されIIF分子内に74に覆われた格好で配位することがわかった。開始型、伸長型RAP74の分解パターンは遊離型のものと大きな変化を認めず、特異的分解産物の出現も認めなかった。しかしながら、RAP30の分解は著明に阻害され、開始/伸長複合体ではRAP30はDNAと結合しトリプシンがさらに作用しにくい状態へ変化するものと考えられた。以上、RAP74の中央ランダム構造はIIF分子の外側に配位しているがこの領域の活性は不明である。ただ、ヒト、ハエ、Xenopus RAP74の間で保存されており何らかの機能を持つことが示唆される。また、今回同定できたC-末の球状構造ドメインの機能も不明なままである。(2) 核抽出蛋白から、伸長型PolIIの単離を試みた。結果はまだ不十分であるが継続する。

1。Analysis of TFIIF functions (1)TFIIF supports RAP30.74, which is used to control simultaneous infection of insect cells. The basic factors (TBP,IIB,IIE) of one party and the other are refined and reconstructed in vitro. The second is to control the "initial"IIF sequence by using the minimum DNA sequence of the main sequence. At the same time, the structure of IIF was analyzed by IIF single "free IIF" and IIF/PolII/DNA complex "elongated IIF". RAP74, N-terminal about 20K, C-terminal 15K, spherical structure, intermediate structure, rich center structure, high sensitivity structure, tripartite structure. RAP30 and 74 were dissociated at about 14K and then cleaved into IIF molecules. The decomposition of the initial and elongated RAP74 is different from that of the free RAP 74, and the appearance of specific decomposition products is different. The decomposition of RAP30 in the presence of light, inhibition, initiation/elongation complex, and binding of RAP30 in the presence of light, inhibition, and degradation. Above, RAP74's central structure is the outer coordination of IIF molecules. The activity of this domain is unknown. Xenopus RAP74 has been preserved for a long time. The function of the spherical structure is unknown. (2)Nuclear extraction protein, elongation PolII and separation test The result is not very good.

项目成果

Oshiro,S.,et al: "Aluminum taker up by transferrin-independent uptake affects the iron metabolism in rat cortical cells." J.Biochem.123. 42-46 (1998)

Oshiro,S.等人：“不依赖转铁蛋白的铝吸收会影响大鼠皮质细胞中的铁代谢。”

Cai,Y,et al: "Structure of the human transaiption factor TFIIF revealed by limited proteolysis with trypsin" FEBS Letters. 435. 191-194 (1998)

Cai,Y,et al：“通过胰蛋白酶有限蛋白水解揭示的人类转运因子 TFIIF 的结构”FEBS Letters。

Nakamura,R.,et al: "The PC motif : a novel and evolutionally conserved sequence involved in intereotion between p40 and p67 phox,SH3 domach-containing aytosolic factors of NADPH oxidase" Eur.J.Biochem.251. 583-589 (1998)

Nakamura,R.等人：“PC 基序：一种新颖且进化上保守的序列，涉及 p40 和 p67 phox、SH3 domach 的 NADPH 氧化酶的含溶质因子之间的相互作用”Eur.J.Biochem.251。

Sugimoto,R.,et al: "Cloning and characterization of the Hekata antigen,a member of the ficolin/opsonin p35 lectin family" J.Biol.Chem.273. 20721-20727 (1998)

Sugimoto,R.,et al：“Hekata 抗原的克隆和表征，它是纤维胶蛋白/调理素 p35 凝集素家族的成员”J.Biol.Chem.273。

Verhoef,K.,et al: "Evolution of the HIV-1 LTR promoter by conversion of an NF-KB enhancer element into a GABP binding site." J.Virology. (in press). (1999)

Verhoef,K.,et al：“通过将 NF-KB 增强子元件转化为 GABP 结合位点来进化 HIV-1 LTR 启动子。”