Conditional Targeting 法による生命機能の解明

使用条件靶向方法阐明生物学功能

• 批准号: 07260217
• 负责人: 鍋島 陽一
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: National Center of Neurology and Psychiatry
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07260217/
• 关键词: 相同組み換え; Cre-リコンビネース; LoxP 配列; 遺伝子ノックアウト

組織特異的に遺伝子機能を欠失させるシステムの開発を目的として実験を行い、次の結果を得た。1)標的遺伝子の目的配列を挟んでリコンビネースの認識配列であるloxPを2個もつターゲッテイングベクターを作り、相同組み替え細胞を作成した。この細胞にリコンビネース発現プラスミドをトランスフェクトし、TK遺伝子の欠失をマーカーとして細胞を選択したところ、大部分の細胞でloxPにかこまれた遺伝子が切り取られていることが確認された。現在、個体レベルでの検討を行っている。2)loxP配列を3個もつ相同組み換えベクターを構築し、相同組み換えES細胞をえた。この細胞にリコンビネースを発現させ、3種類の組み合わせでloxPに囲まれた配列が切り取られた細胞を分離することを試みたが、細胞を分離することができなかった。原因は特定できなかったがGANCを選択に利用することが問題と考え、GANCによる選択をせずに無作為に細胞クローンを選択し、PCRによって解析することにより、目的の細胞を得ることに成功した。3)トランスジェニックマウスを作成する過程で挿入突然変異により、早期老化を示す変異マウス系統を樹立することに成功した。遺伝形式は劣性でホモ個体のみが早期死亡、発育障害、老人性動脈硬化、骨密度の低下、神経細胞の脱落、性腺の萎縮、胸腺の萎縮、軟部組織の石灰化など、顕著な老化症状を呈する。一カ所に遺伝子が挿入されており、その領域に個体老化に関連する重要な遺伝子が存在していると推定され、現在、原因遺伝子のクローニングを行っている。

に of tissue specific 伝 sub function lost を owe さ せ る シ ス テ ム の open 発 を purpose と し て be 験 を い, time の results を た. 1) mark heritage 伝 の purpose with sequence を carry ん で リ コ ン ビ ネ ー ス の meet with column で あ る loxP を 2 も つ タ ー ゲ ッ テ イ ン グ ベ ク タ ー み を り, the same group for を え cells into し た. こ の cells に リ コ ン ビ ネ ー ス 発 now プ ラ ス ミ ド を ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, TK legacy 伝 の owe son lost を マ ー カ ー と し て cells を sentaku し た と こ ろ, most の cell で loxP に か こ ま れ た heritage 伝 child cut が り take ら れ て い る こ と が confirm さ れ た. Now, the individual レベ で で 検 検 is seeking を and って る る る. 2)loxP is paired with を3 <s:1> identical groups み for えベ タ を を を to construct <s:1>, and the same groups み for えES cells をえた. こ の cells に リ コ ン ビ ネ ー ス を 発 now さ せ, group 3 kinds の み わ せ で loxP に 囲 ま れ た match column cut が り take ら れ た を isolated す る こ と を try み た が, cell separation を す る こ と が で き な か っ た. Cause は で き な か っ た が GANC を sentaku に using す る こ と が え と test, GANC に よ る sentaku を せ ず に inaction に cells ク ロ ー ン を sentaku し, PCR に よ っ て parsing す る こ と に よ り, objective の cells を る こ と に successful し た. 3) ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を made す る process で scions sudden variations in different に よ り, early aging を す - different マ ウ を ス system set up す る こ と に successful し た. The 伝 form of <s:1> poor でホモ individuals <s:1> みが die early, suffer from reproductive disorders, develop arteriosclerosis in the elderly, have low bone density <s:1>, experience the shedding of nervous cells, atrophy of the gonads, atrophy of the thymus, and callification of the soft tissue な <s:1>, 顕 and な aging symptoms を present as する. An カ に heritage 伝 son が scions into さ れ て お り, そ の field に individual aging に masato even す る important な heritage 伝 son が exist し て い る と presumption さ れ, now, why but 伝 の ク ロ ー ニ ン グ を line っ て い る.

项目成果

Yoshida S.: "Lyso ghoephatidic a cid and bFGF control different modeo in proliferting myoblosts." J. Cell Biol.132. 181-193 (1996)

Yoshida S.：“Lyso ghoephatidic a cid 和 bFGF 控制成肌细胞增殖中的不同模式。”

Hirata J.: "Asymmretrie segregation of the homeodomain protein Pruspero during Drosophila denelopment." Nature. 377. 627-630 (1995)

Hirata J.：“果蝇发育过程中同源结构域蛋白 Pruspero 的不对称分离。”

Yagami-Hiromasa T.: "A mltalloprotease-disintegrin porticipating in myoblast fusion" Natuve. 377. 652-656 (1995)

Yagami-Hiromasa T.：“参与成肌细胞融合的一种金属蛋白酶解整合素”Natuve。

Hoshino M.: "Hikari Gonki protein is secreted into synaptic clefts from an early stage of synapse formation in Drosophila" Development. (印刷中).

Hoshino M.：“Hikari Gonki 蛋白在果蝇突触形成的早期阶段被分泌到突触间隙”（正在出版）。

Kuro-o M.: "Overexpresion of sodium- proton exchanger causes salt-sensitive blmd pressure elevation is transgenic mice" Circulation Res.76. 148-153 (1995)

Kuro-o M.：“转基因小鼠中钠-质子交换器的过度表达导致盐敏感的 blmd 压力升高”循环研究 76。