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高等植物原形質膜G蛋白質の構造、機能と器官特異性の解析

高等植物质膜G蛋白的结构、功能和器官特异性分析

基本信息

批准号：
07270219
负责人：
岩崎行玄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Fukui Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07270219/
关键词：
イネ原形質膜高等植物シグナル情報伝達 3重体G蛋白質

项目摘要

イネG蛋白質αサブユニットの機能解析・原形質膜局在化の同定イネG蛋白質αサブユニット融合蛋白質の精製と機能解析:ヒスチジンヘキサマーのタグを有するpQE30ベクター(QIAGEN)を用いて、大腸菌にイネG蛋白質αサブユニット(RGA1)融合蛋白質を発現させ、46kDaの見かけの分子量を示す産物を精製した。精製産物は、[35S]GTPγS結合能、GTPase活性を、共に有していた。この結果は、動物のホモログとして単離され、塩基配列の類似性から推察していたイネ3量体G蛋白質αサブユニットcDNA(RGA1)の翻訳産物が、GTP結合能、および加水分解能を有することを示した。特異抗体の調製:イネG蛋白質αサブユニットに対する融合蛋白質を、マウスに免疫した後、2種のモノクローナル抗体(A5-D11、B2-C1)を作製した。イネG蛋白質αサブユニットの細胞内局在性:暗所下で育てた黄色葉から、おのおの、ミトコンドリア、粗ミクロソーム、および水性2相分配法にて原形質膜の調製した後、上記の2種類のモノクローナル抗体を用いてWestern blottingにて解析した。両抗体は、原形質膜画分の45kDa蛋白質と特異的に反応した。次に電気泳動にて、上記の45kDa蛋白質領域を切りだし、V8プロテアーゼによるペプチドマップを行い、Western blottingにて切断パターンを解析したところ、イネG蛋白質αサブユニット(RGA1)融合蛋白質のペプチドマップのそれと一致した。以上のことから、RGA1の翻訳産物は、原形質膜画分に局在する45kDa蛋白質であると判断した。

Functional Analysis of G Protein α-Serotype Protein α-Serotype Protein The purified product has a combination of [35S]GTPγS binding energy and GTase activity. The results show that there are differences in the molecular structure and the similarity of the nucleotide sequences in animals, and that there are differences in the molecular structure, GTP binding energy, and hydrolysis energy of 3-dimensional G protein α-nucleotide cDNA(RGA1). Specific antibody modulation: G protein alpha protein fusion protein, after immunization, two kinds of antibody (A5-D11, B2-C1) are produced. The intracellular localization of G protein α-protein: yellow leaves under dark, yellow leaves under dark. The antibody is specific for the 45kDa protein in the protoplasma membrane. Next, the 45kDa protein domain was analyzed by electrophoresis, V8 protein domain analysis, Western blotting, and G protein domain analysis. The above results show that RGA1 protein is a 45kDa protein in the plasma membrane.