高等植物原形質膜G蛋白質の構造、機能と器官特異性の解析

高等植物质膜G蛋白的结构、功能和器官特异性分析

• 批准号: 07270219
• 负责人: 岩崎 行玄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Fukui Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07270219/
• 关键词: イネ; 原形質膜; 高等植物; シグナル情報伝達; 3重体G蛋白質

イネG蛋白質αサブユニットの機能解析・原形質膜局在化の同定イネG蛋白質αサブユニット融合蛋白質の精製と機能解析:ヒスチジンヘキサマーのタグを有するpQE30ベクター(QIAGEN)を用いて、大腸菌にイネG蛋白質αサブユニット(RGA1)融合蛋白質を発現させ、46kDaの見かけの分子量を示す産物を精製した。精製産物は、[35S]GTPγS結合能、GTPase活性を、共に有していた。この結果は、動物のホモログとして単離され、塩基配列の類似性から推察していたイネ3量体G蛋白質αサブユニットcDNA(RGA1)の翻訳産物が、GTP結合能、および加水分解能を有することを示した。特異抗体の調製:イネG蛋白質αサブユニットに対する融合蛋白質を、マウスに免疫した後、2種のモノクローナル抗体(A5-D11、B2-C1)を作製した。イネG蛋白質αサブユニットの細胞内局在性:暗所下で育てた黄色葉から、おのおの、ミトコンドリア、粗ミクロソーム、および水性2相分配法にて原形質膜の調製した後、上記の2種類のモノクローナル抗体を用いてWestern blottingにて解析した。両抗体は、原形質膜画分の45kDa蛋白質と特異的に反応した。次に電気泳動にて、上記の45kDa蛋白質領域を切りだし、V8プロテアーゼによるペプチドマップを行い、Western blottingにて切断パターンを解析したところ、イネG蛋白質αサブユニット(RGA1)融合蛋白質のペプチドマップのそれと一致した。以上のことから、RGA1の翻訳産物は、原形質膜画分に局在する45kDa蛋白質であると判断した。

イ ネ G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の functional analytic base, plasma membrane bureau with fixed in turn の イ ネ G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト fusion protein の refined と function resolution: ヒ ス チ ジ ン ヘ キ サ マ ー の タ グ を have す る pQE30 ベ ク タ ー (QIAGEN) を い て, coliform に イ ネ G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト (RGA1) fusion Protein を appears させ, 46kDa <e:1> is shown in を け <s:1> molecular weight を indicates す product を refined た た. The refined product を, [35S]GTPγS binding energy, GTPase activity を, and a total of に て た た た. こ の results は, animal の ホ モ ロ グ と し て 単 from さ れ, salt base with column の similarity か ら push examine し て い た イ ネ quantity body 3 G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト cDNA (RGA1) product の turn 訳 が, GTP binding energy, made お よ び hydrolytic decomposition can have す を る こ と を shown し た. Specific antibody の modulation: イ ネ G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト に す seaborne る fusion protein を, マ ウ ス に immune し た, after two の モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies (A5 - D11, B2 - C1) を cropping し た. イ ネ G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の cells inside bureau in sex: dark で under the yukon て た yellow leaf か ら, お の お の, ミ ト コ ン ド リ ア, coarse ミ ク ロ ソ ー ム, お よ び aqueous two phase distribution method に て prototype plasma membrane の modulation し た, written after の 2 kinds の モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody with い て Western blottingにて analysis of た. Two antibodies and the protoplasmic membrane divide the <s:1> 45kDa protein と specific に antiantibody 応 た. Bathing time に electric 気 に て, written の cut 45 kda protein domain を り だ し, V8 プ ロ テ ア ー ゼ に よ る ペ プ チ ド マ ッ プ を い, Western Blotting に て cut パ タ ー ン を parsing し た と こ ろ, イ ネ G protein alpha サ ブ ユ ニ ッ ト (RGA1) fusion protein の ペ プ チ ド マ ッ プ の そ れ と consistent し た. The above <s:1> た と ら ら ら, RGA1 訳 product, and the original plasma membrane map are divided into に parts at する45kDa protein であると to determine the た.

项目成果

Ishikawa,A.et al.: ""Molecular cloning and characterization of a cDNA for the β subunit of a G protein from rice."" Plant Cell Physiol.(in press).

Ishikawa, A. 等人：“水稻 G 蛋白 β 亚基 cDNA 的分子克隆和表征。”《植物细胞生理学》（出版中）。

Iwasaki,Y.et al.: ""Molecular cloning of cDNA for a 17.5-kDa polypeptide,the psaL gene product,associated with cucumber Photosystem I."" Biosci.Biotech.Biochem.59(9). 1758-1760 (1995)

Iwasaki, Y. 等人：“17.5-kDa 多肽（psaL 基因产物，与黄瓜光系统 I 相关）的 cDNA 分子克隆。”Biosci.Biotech.Biochem.59(9)。

Ishikawa,A.,et al.: ""Molecular cloning and characterization of cDNA for an α subunit of G protein from rice."" Plant Cell Physiol.36(2). 353-359 (1995)

Ishikawa, A. 等人：“水稻 G 蛋白 α 亚基 cDNA 的分子克隆和表征。”Plant Cell Physiol.36(2) (1995)。

Iwasaki,Y.et al.,: ""Molecular cloning and characterization of cDNA for a protein containing seven repetitive segments of Trp-Asp amino acids repeat(WD-40 repeat) from rice."" Plant Cell Physiol.36(3). 505-510 (1995)

Iwasaki, Y. 等人，：“来自水稻的含有七个重复片段的 Trp-Asp 氨基酸重复序列（WD-40 重复序列）的蛋白质 cDNA 的分子克隆和表征。”植物细胞生理学 36(3)