血管新生に関与する転写因子の機能解析

血管生成相关转录因子的功能分析

• 批准号: 07273205
• 负责人: 佐藤 靖史
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273205/
• 关键词: 血管新生; 血管新生因子; ets-1; アンチセンス; MMP-1; 細胞遊走

培養ヒト血管内皮細胞を代表的な血管新生因子であるbFGF、aFGF+heparin、EGF、VEGFで刺激すると、いずれもets-1を発現することがRT-PCRで確認された。そこでets-1の発現を定量的に解析するために、RT-PCR産物をプローブにしてNorthern blotを行ったところ、ets-1の発現はいずれも2時間以内にピークに達し、12時間後には前値に回復することが確認された。Western blotの結果、ets-1に対するアンチセンスODN(20μM)は血管新生因子の刺激に反応したets-1蛋白の産生を著名に抑制したのに対して同量のセンスODNでは全く影響されなかった。そこでアンチセンスとONDを用いて以下の実験を行った。HOME細胞を1型コラーゲンゲル上に培養してEGFを添加すると、HOME細胞はゲル中に侵入して管腔を形成する。このときアンチセンスODN(20μM)を同時添加するとEGFによる管腔形成促進効果を有意に抑制されたが、センスODNでは抑制は見られなかった。アンチセンスODNは、EGFに反応したHOME細胞のMMP-1(matrixmetalloproteasel)の発現を抑制するとともに、細胞遊走をも有意に抑制することが明らかとなった。以上より、ets-1は内皮細胞に発現して血管新生を制御する重要な調節因子と考えられた。

Angiogenic factors such as bFGF, aFGF+heparin, EGF and VEGF were stimulated by cultured vascular endothelial cells and detected by RT-PCR. Northern blot analysis of ets-1 and detection of ets-1 were performed within 2 hours and 12 hours respectively. Western blot results showed that ets-1 had a negative effect on the production of ets-1 protein (20μM). The following is an example of how to do this: HOME cell type 1 cells must be cultured and EGF must be added. HOME cell type 1 cells must be cultured and EGF must be added. The effect of EGF on lumen formation was intentionally suppressed by adding EGF to ODN(20μM). The expression of MMP-1(matrixmetalloproteasel) in HOME cells was inhibited by EGF and ODN, and cell migration was intentionally inhibited. These factors are important regulators of endothelial cell production and angiogenesis.