遅延型増殖抑制を起こす転写因子HIC-5遺伝子の機能

导致延迟生长抑制的转录因子 HIC-5 基因的功能

• 批准号: 07273266
• 负责人: 柴沼 質子
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273266/
• 关键词: 細胞分化; HIC-5遺伝子; DNA結合性

従来の我々の研究からTGFβ_1およびH_2O_2で誘導されるHIC-5遺伝子産物はLIMモチーフに属するZnフィンガーを持ちDNAに結合能を有すること、またこの強制発現により不死化細胞の老化を誘導することが明らかとなっている。本研究ではまず、In situ hybridizationによりHIC-5遺伝子の成熟および胎児マウス組織における発現を検討したところ、ある種の細胞の分化に関与している可能性が示された。そこでNGFで神経細胞様に分化することが知られているラット副腎髄質褐色細胞腫由来細胞PC12やマウス筋芽細胞C2C12にHIC-5センス発現プラスミドを導入し分化への関与を検討した。PC12細胞ではコントロールに比べ神経様突起の進展が見られ、C2C12細胞ではMyosin heavy chainを分化マーカーとしたとき分化が促進される傾向が見られた。さらに、細胞の分化への関与とhic5蛋白質のDNA結合特異性を解析した。HIC-5蛋白質の結合DNA配列を明らかにする目的で大腸菌で作製したHIC-5蛋白質とマウスゲノムDNA(制限酵素で200-300bpに切断したもの)を反応させた後、HIC-5タンパク質に対する抗体を用いてHIC-5蛋白質と結合した断片を回収し、PCRで増幅したこの操作を繰り返し、HIC-5蛋白質結合断片を濃縮し、クローン化した断片について、south-western法、gel shift assay法により結合性を確認した。得られた7つの結合断片の配列を決定したところ6つが数十bpにおよぶ(A)_nCから成る特徴的な繰り返し配列を共通に含んでいた。さらにDNaseI foot printingにより断片中のHIC-5蛋白質結合部位を同定したところ(A)_nC配列部分であることが示唆された。このようにHIC-5遺伝子は老化や細胞分化といった非可逆的な増殖停止機構に関与している可能性があり、今後この点をその産物のDNA結合および他の因子との相互作用の面からさらに明らかにしていきたい。

Recent studies have shown that HIC-5 gene products induced by TGFβ_1 and H_2O_2 can bind to DNA in the presence of LIM, and can induce aging in immortal cells. This study was conducted to investigate the possibility of maturation and development of HIC-5 gene In situ hybridization, and the relationship between cell differentiation and differentiation. In addition, NGF was introduced into the differentiation process of neurons, and the relationship between NGF and differentiation was discussed. PC12 cells have a tendency to differentiate from myosin heavy chain, while C2C12 cells have a tendency to differentiate from Myosin heavy chain. Analysis of DNA binding specificity of hic5 protein related to cell differentiation. HIC-5 protein binding DNA alignment is clearly indicated for the purpose of E. coli production. HIC-5 protein binding DNA After reverse transcription (restriction enzyme 200-300bp), HIC-5 protein binding fragment was recovered by antibody against HIC-5 protein, PCR amplification was performed, HIC-5 protein binding fragment was concentrated, fragment was purified, south-western method and gel shift assay were used to confirm binding. The combination of 7 and 6 fragments is determined by the combination of 7 and 6 bp. The combination of 7 and 6 bp is determined by the combination of 7 and 6 bp. The HIC-5 protein binding site in the DNase I foot printing fragment was identified as the (A)_nC alignment site. The HIC-5 gene is responsible for the possibility of irreversible growth arrest mechanisms associated with aging and cell differentiation, and for the interaction of DNA binding with other factors in the future.

项目成果

Shibanuma, M.: "Activation of DNA synthesis and expression of the JE gene by catalase in mouse osteoblastic cells." Exp. Cell Res.218. 132-136 (1995)

Shibanuma, M.：“小鼠成骨细胞中过氧化氢酶激活 DNA 合成和 JE 基因表达。”

Egawa, K.: "Isolation of a novel ras-recision gene that is induced by hydrogen peroxide from a mouse osteoblastic cell line, MC3T3-E1" FEBS Lett.372. 74-77 (1995)

Ekawa, K.：“从小鼠成骨细胞系 MC3T3-E1 中分离出一种由过氧化氢诱导的新型 ras 切除基因”FEBS Lett.372。