TGFbetaで誘導されrasで発現の消失する遺伝子(HIC-5)の増殖における機能の解析

TGFbeta诱导且其表达被ras消除的基因（HIC-5）在增殖过程中的功能分析

• 批准号: 05152117
• 负责人: 柴沼 質子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152117/
• 关键词: TGF-beta; cDNA; 増殖制御

TGFbetaで誘導される新規遺伝子として分離したHIC-5遺伝子は、C-末端にlin-11と相同性を示す7個のZn-フィンガーを持っていることから転写制御因子の一つと予想される。本年度はこの遺伝子産物の構造と機能の解析を行った。HIC-5cDNAは440個のアミノ酸からなる蛋白質をコードし、この蛋白質はN-末端にProに富む領域を持つと予想された。アミノ酸配列から合成ペプチドを作り、その抗体を作成した。これを用いた免疫沈降の結果、HIC-5蛋白質は核に局在することが示された。HIC-5遺伝子の塩基配列はマウスとヒトとの間で保存されていると考えられ、この遺伝子の発現は、v-rasで形質転換したNIH 3T3細胞および各種のヒト癌細胞株で著しく低下していた。逆に正常ヒト繊維芽細胞の若い細胞での発現は低く、加令し増殖を停止した細胞において上昇した。この増殖における機能を直接的に解析するため、HIC-5 cDNAの動物細胞での発現ベクターを構築し、細胞への導入を行った。発現ベクターとしてネオマイシン耐性遺伝子を含むプラスミドを用い、MC3T3細胞および不死化ヒト繊維芽細胞(KMST-6)に導入してネオマイシン耐性コロニーの出現頻度を測定した。その結果、HIC-5の発現はコロニー形成率を低下させ、細胞増殖の抑制作用を持つことが示された。しかし、発現ベクターを細胞へマイクロインジェクションしてもDNA合成には影響せず、HIC-5遺伝子産物は細胞周期進行を制御するのではなく、分裂回数の計測に関与することが考えられる。現在HIC-5蛋白質が結合するDNA配列および核蛋白質の検索を行っている。

TGFbeta induces new gene expression, separates HIC-5 gene expression, C-terminal gene expression, lin-11 gene expression, and identifies 7 Zn-binding genes. This year, the structure and function of the genetic products were analyzed. HIC-5 cDNA contains 440 amino acids, and this protein has a rich N-terminal Pro domain. For example, if you want to make an antibody, you can make an antibody. The HIC-5 protein was detected by immunoprecipitation. The gene alignment of HIC-5 gene was preserved in NIH-3 cells and various cancer cell lines. In contrast, some of the normal cells in the cell line were found to be low, and some cells were found to be high. The expression and function of HIC-5 cDNA were analyzed directly, and the expression and construction of HIC-5 cDNA in animal cells were carried out. The frequency of occurrence of resistant genes in MC3T3 cells and KMST-6 cells was measured. As a result, the development of HIC-5 and the inhibition of cell proliferation were demonstrated. DNA synthesis, HIC-5 gene products, cell cycle control, and measurement of the number of mitotic cycles are also discussed. Now HIC-5 protein binds to DNA alignment and nuclear protein mapping.

项目成果

SHibanuma,M.et al.: "Cloning from a mouse ostcoblastic cell line a set of TGFbeta-regulated genes,one of which seems to enade a foll:statin-related polypeptide" Eur.J.Bicchem.217. 13-19 (1993)

SHibanuma,M.et al.：“从小鼠成骨细胞系克隆一组 TGFbeta 调节基因，其中一个似乎包含 Foll：他汀类药物相关多肽”Eur.J.Bicchem.217。