細胞刺激により放出される活性酸素の細胞内標的蛋白の同定とアミノ酸配列の決定

细胞刺激释放的活性氧胞内靶蛋白的鉴定及氨基酸序列的测定

• 批准号: 05771982
• 负责人: 柴沼 質子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771982/
• 关键词: 活性酸素; 細胞内標的蛋白質; アミノ酸配列

ヒト白血病細胞U937を^<35>S-メチオニンでラベル後、細胞毒性を示さない濃度(0.1mM)のH_20_2を処理し、全タンパク質の2次元電気泳道を行い、オートラジオグラフィーにより、ラベルされたタンパク質の解析を行った。未処理のものと比較して、ほとんどのタンパク質はH_20_2処理によりその量的変化を示さなかったが、3つの近接したスポットX、Y、Zが処理により消失することを見出した。次に、TPA処理により細胞から活性酸素が放出された時のこれらのタンパク質の変化を同様に検討したところ、X、Yは変化しなかったが、Zは、消失傾向を示し、その変化は、TPA処理と同時に活性酸素消去酵素、SOD、catalaseを加えておくこと抑制された。また、ヒト内皮細胞をTNFalphaで刺激した時にも細胞から活性酸素が放出されるが、この時にもスポットZは消失傾向を示した。以上の結果から、スポットZは、細胞刺激により放出される活性酸素の細胞内標的タンパク質と考えられた。スポットZの分子量は、約48kDa、pIは約6.7である。今後、2次元電気泳動により、このタンパク質500pMを分離精製後、トリプシンにてペプチドフラグメントに分解し、それをHPLCにて分離、マイクロシークエンサーによりアミノ酸配列を決定の予定である。アミノ酸配列が未知のものであったときには、決定アミノ酸配列をもとにオリゴヌクレオチドを合成し、cDNAライブラリーからPCRにてcDNAを単離、解析する予定である。

After <35>treatment with H_2O_2 at 0.1 mM, the cytotoxicity of leukemia cells U937 was demonstrated. The 2D electrical energy lanes of the whole cell line were analyzed. Untreated samples are compared with each other, and the quality of the samples is improved. The quality of the samples is improved by H_20_2 treatment. In addition, TPA treatment also increases the activity of acid-eliminating enzymes, SOD and catalase. When endothelial cells are stimulated by TNFalpha, the active acid released by endothelial cells tends to disappear. The above results show that the release of active acids in cells is stimulated by cell stimulation. The molecular weight of Z is about 48kDa and the pI is about 6.7 kDa. In the future, after the separation and purification of 500pM of the two-dimensional electrokinetic reaction, the separation and separation of the selected substances by HPLC, the determination of the acid sequence by HPLC, and the determination of the acid sequence by HPLC will be carried out. For example, if the sequence of DNA is unknown, the sequence of DNA will be determined. If the sequence of DNA is unknown, the sequence of DNA will be determined. If the sequence of DNA is unknown, the sequence of cDNA will be determined. If the sequence of DNA is unknown, the sequence of cDNA will be determined. If the sequence of DNA is unknown, the sequence of cDNA will be determined. If the sequence of cDNA is unknown, the sequence of cDNA will be determined. If the sequence of cDNA is unknown, the sequence of cDNA will be determined. If the sequence of cDNA is unknown, the sequence of cDNA will be determined.

项目成果

Nose,K.et al: "Oxidative Stress,Cell Activation and Viral Infection" ed.C.Pasguier et al(Birkhanser Verlag AG), 13 (1994)

Nose,K.等人：“氧化应激、细胞激活和病毒感染”ed.C.Pasguier 等人(Birkhanser Verlag AG)，13 (1994)

Shibanuma,M.et al: "Cloning from a mouse osteoblastic cell line of a set of transforming-growth-factor-B1-regulated genes,one of which secms to encode a follistatin-related polypeptide." Eur.J.Biochem.217. 13-19 (1993)

Shibanuma,M.等人：“从小鼠成骨细胞系中克隆一组转化生长因子 B1 调节基因，其中一个可以编码卵泡抑素相关多肽。”

Nose,K.et al: "Induction of early response genes by hypergravity in cultured mouse osteoblastic cells (MC3T3-E1)" Exptl.Cell Res.(in press). (1994)

Nose,K.等人：“在培养的小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）中通过超重力诱导早期反应基因”Exptl.Cell Res.（正在印刷中）。