タンパク質内部高秩序環境場におけるピリドキサールリン酸の光反応ダイナミックス

蛋白质内高度有序环境中磷酸吡哆醛的光反应动力学

• 批准号: 08218102
• 负责人: 原 三郎
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08218102/
• 关键词: ピリドキサールリン酸; 光反応ダイナミックス; レーザーホトリシス

ピリドキサール5'ーリン酸(PLP)酵素,トリプトファナーゼ,分枝アミノ酸トランスアミナーゼ,芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼの光反応ダイナミックスを検討した.分枝アミノ酸トランスアミナーゼは,335nmと415nmに吸収極大があり,いずれを励起しても,530nmに蛍光スペクトルが得られる.ナノ秒レーザー光(355nm)により,470nmに過渡吸収が得られ,寿命は230nsとマイクロ秒オーダーである.芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼは,335nmと420nmに吸収極大を持ち,420nmで励起すると510nmに,335nmで励起すると510nmと380nmに蛍光スペクトルが得られる.380nmの蛍光スペクトルはアミノ酸が求核攻撃してできるsp3構造のPLPと考えられる.ナノ秒レーザー光(347.2nm)により,480nmに過渡吸収が得られ,寿命まは250nsと4.5μsの2成分である.トリプトファナーゼの吸収スペクトルはpHによって変化し,pH6では422nm,pH9.5では338nmの極大がある.422nmで励起すると510nmに,328nmを励起すると383nmに蛍光スペクルトルが見られる.ナノ秒レーザー光(355nm)で,pH6.5では,415nmと475nmに過渡吸収が得られ,それぞの寿命は約30μsと280nsである.510nmに極大を持つ蛍光スペクトルも得られ,寿命は8nsである.pH9.5では,380nmに寿命約10nsの蛍光スペクトルが得られた.pH6.5での415nmの過渡種は他の酵素にはないものである.酵素によってそれぞれ異なる光反応ダイナミックスを示すことから,タンパク質内部の構造を反映しているものと考えられる.

ピ リ ド キ サ ー ル 5 'ー リ ン acid (PLP) enzyme, ト リ プ ト フ ァ ナ ー ゼ, branch ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ア ミ ナ ー ゼ, aromatic ア ミ ノ acid デ カ ル ボ キ シ ラ ー ゼ の light anti 応 ダ イ ナ ミ ッ ク ス を beg し 検 た. Branch ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ア ミ ナ ー ゼ は, 335 nm 415 nm と に 収 absorption maximum が あ り, い ず れ を wound up し て も, 530 nm に 蛍 light ス ペ ク ト ル が have ら れ る. ナ ノ seconds レ ー ザ ー light (355 nm) に よ り, 470 nm に transition suction 収 が must ら れ, life は 230 ns と マ イ ク ロ seconds オ ー ダ ー で あ Youdaoplaceholder0. Aromatic ア ミ ノ acid デ カ ル ボ キ シ ラ ー ゼ は, 335 nm 420 nm と に 収 を hold ち great absorption, 420 nm で す since excitation る と 510 nm に, 335 nm で す since excitation る と 510 nm 380 nm と に 蛍 light ス ペ ク ト ル が have ら れ る. 380 nm の 蛍 light ス ペ ク ト ル は ア ミ ノ acid が seeks nuclear strike shock し て で き る Sp3 tectonic の PLP と exam え ら れ る. ナ ノ seconds レ ー ザ ー light (347.2 nm) に よ り, 480 nm に transition suction 収 が must ら れ, life ま は 250 ns と 4.5 mu s の 2 ingredients で あ る. ト リ プ ト フ ァ ナ ー ゼ の suction 収 ス ペ ク ト ル は pH に よ っ て - し, pH6 で は 422 nm, pH9.5 で は 338 nm の greatly が あ る. 422 nm で す since excitation る と 510 nm に, 328 nm を wound up す る と 383 nm に 蛍 light ス ペ ク ル ト ル が see ら れ る. ナ ノ seconds レ ー ザ ー light (355 nm) で, pH6.5 で は, 415 nm 475 nm と に transition suction 収 が must ら れ, そ れ ぞ の は about 30 mu "s life と 280 ns で あ る. 510 nm に を hold great つ 蛍 light ス ペ ク ト ル も have ら れ, life は 8 ns で あ る. PH9.5 で は, 380 nm に life about 10 ns の 蛍 light ス ペ ク ト ル が have ら れ た. PH6.5 で の 415 nm の transition of は he の enzyme に は な い も の で あ る. Enzyme に よ っ て そ れ ぞ れ different な る light anti 応 ダ イ ナ ミ ッ ク ス を shown す こ と か ら, タ ン パ ク mass internal structure を の reflecting し て い る も の と exam え ら れ る.

项目成果

T.-N.Pham: "A new family of serine protease inhibitors(bombyx family)as established from the unique topological relation between the positions of disulfide bridges and reactive site." J.Biochem.119(3). 428-434 (1996)

T.-N.Pham：“根据二硫键位置和反应位点之间独特的拓扑关系建立了一个新的丝氨酸蛋白酶抑制剂家族（家蚕家族）。”

T.-N.Pham: "Expression of bombyx family fungal protease inhibitor F from Bombyx mori by baculovirus vector." J.Biochem.119(6). 1080-1085 (1996)

T.-N.Pham：“通过杆状病毒载体表达家蚕家族真菌蛋白酶抑制剂 F。”

Y.Matsuda: "Limited proteolysis by chymotrypsin of midkine and inhibition by heparin binding." Biochem.Biophys.Res.Commun.228(1). 176-181 (1996)

Y.Matsuda：“胰凝乳蛋白酶对中期因子的有限蛋白水解作用和肝素结合的抑制作用。”

K.Kasahara: "Complete sequence,subunit structure,and complexes with pancreatic α-amylase of an α-amylase inhibitor from Phaseolus vulgaris white kidney beans." J.Biochem.120(1). 177-183 (1996)

K. Kasahara：“来自菜豆的 α-淀粉酶抑制剂的完整序列、亚基结构和与胰腺 α-淀粉酶的复合物。J.Biochem.120(1) (1996)。

H.Hayashi: "Analysis of Substrate-Recogntion Mode of Aromatic Amino Acid Aminotransferase by Combined Use of Quasisubstrate and Site-Directed Mutagenesis:Systematic Hydroxy-Group Addition/Deletion Studies to Probe the Enzyme-Substrtate Interactions." Bioc

H.Hayashi：“通过结合使用准底物和定点诱变来分析芳香氨基酸氨基转移酶的底物识别模式：系统性羟基添加/删除研究以探测酶-底物相互作用。”