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昆虫の変態期にホルモンによって誘導される転写因子の制御ネットワークの解析

昆虫变态过程中激素诱导的转录因子调控网络分析

基本信息

批准号：
08250222
负责人：
上田均
金额：
$ 1.92万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08250222/
关键词：
転写活性化 mediator ショウジョウバエ転写因子カイコ酵母

项目摘要

FIZ-F1(BmFTZ-F1)による転写活性化に働く転写mediatorであるMBF1とMBF2の作用機作を探るため、MBF1とMBF2のドメイン解析をおこなった。MBF2のC未満の23アミノ酸を欠くと、TFIIAとの結合能は保持されたが、MBF2との結合能は消失した。このMBF2を用いて、iv vitroでの転写活性能を調べたところ、FTZ-F1依存性の選択的な転写活性化は観察されなかったが、非選択的な転写活性化は観察され、MBF2のMBF1への結合が選択的転写活性化に必要であるという従来のモデルを支持した。MBF1についても部分欠失蛋白を作成し、MBF2、FTZ-F1、TBPとの相互作用を調べたところ、これらすべての因子との相互作用に中央部が大きく貢献しているが、N末端領域とC末端領域も相互作用に関与することを示唆する結果を得た。MBF1は、FTZ-F1 boxを介してFTZ-F1と相互作用することから、FTZ-F1 boxとbasic領域でホモロジーのある酵母のGCN4にMBF1が相互作用し、GCN4による転写活性化にMBF1がかかわることが、予想された。そこで、酵母MBF1をクローニングし、大腸菌で発現させ、GCN4との相互作用を調べたところ、FTZ-F1と同様の相互作用が観察された。また、GCN4の塩基性領域にアミノ酸置換を生じた変異蛋白を作成したところ、MBF1との相互作用が消失し、MBF1は、GCN4のbasic領域を介して相互作用すると考えられた。次に、MBF1の欠失株を作成したところ、aminotriazoleに感受性を示し、酵母生体内でのGCN4による転写活性化にMBF1が重要な役割をになっていることが示唆された。

FIZ-F1(BmFTZ-F1) is a novel method for analyzing the interaction between MBF1 and MBF2. MBF2 has 23 different binding energies, TFIIA has different binding energies, MBF2 has different binding energies. MBF2 is used to modulate the write activity of iv vitro, FTZ-F1-dependent selective write activity, non-selective write activity, MBF2 and MBF1-dependent combination of selective write activity. MBF1, FTZ-F1 and TBP interact with each other, and the interaction between MBF2 and FTZ-F1 and TBP results in a large contribution from the central part and the interaction between N-terminal domain and C-terminal domain. MBF1 interacts with FTZ-F1 box, FTZ-F1 box interacts with GCN4, FTZ-F1 box interacts with GCN The interaction between yeast MBF1, Escherichia coli, GCN4 and FTZ-F1 was investigated. The interaction between MBF1 and GCN4 in the basic domain was investigated. In addition, MBF1 was not produced in the presence of GCN4, but in the presence of aminotriazole, and MBF1 was activated in yeast.