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神経線維腫症1型遺伝子異常の蛋白発現ベクターを応用した診断法の確立

神经纤维瘤病1型基因异常蛋白表达载体诊断方法的建立

基本信息

批准号：
08266237
负责人：
松尾雅文
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266237/
关键词：
In vitro翻訳転写点突然変異マイクロサテライトがん遺伝子

项目摘要

巨大な遺伝子あるいは多くのエクソンを有する遺伝子で、遺伝子の中に存在する点突然変異を明らかにすることは極めて困難なことである。そのため、遺伝子異常解析上の難点を克服するため様々な方法が考えられてきている。研究者は遺伝子の異常をDNAを直接解析することにより明らかにするのではなく、遺伝情報の産物である蛋白を解析することにより効率的な遺伝子異常解析システムが確立されると着想した。そして、リンパ球中のmRNAを解析材料として、これを逆転写酵素によりcDNAにかえ、このcDNAをテンプレートしてIn vitroでの転写・翻訳系を用いて蛋白を産生させ、産生された蛋白のサイズの異常を明らかにする解析系を構築してきた。現在、本システムの有用性を検討するため、がんの発生と大きく関与しているDNA修復遺伝子で、その異常検出能について解析している。そして、遺伝子異常検出能を検討する準備段階としてDNA修復遺伝子異常の存在を発見する方法の確立につとめた。そのため、DNA修復遺伝子異常の存在を示唆するマイクロサテライトの不安定性の容易な検出法の確立をはかった。ここでは、自動DNA塩基配列解析方法を応用した簡易なマイクロサテライト不安定性の検出法を確立した。これにはマイクロサテライトを蛍光ラベルしたプライマーを用いてPCR増幅し、これを自動DNA塩基配列解析装置により分離同定した。この方法では2塩基の差も明らかに分離でき、高性能でしかも容易な方法が確立できた。そして、この方法を用いて日本人のがん家系でマイクロサテライト不安定性を示す例を発見することが出来た。この症例では、DNA修復遺伝子の異常が強く疑われ、DNA修復遺伝子の異常を今回確立したIn vitro翻訳系で解析している。

A large number of people have a large number of problems, such as sudden changes in the light, extreme difficulties, etc. How to overcome the difficulties in the analysis of abnormal data The researchers analyzed the abnormal DNA of the gene directly and established the abnormal DNA analysis system of the gene. In vitro, the mRNA in the protein was analyzed, and the cDNA was analyzed by reverse transcription enzyme. In vitro, the mRNA in the protein was analyzed, and the protein in the protein was analyzed. Now, the usefulness of this system is discussed, and the development of DNA repair genes and abnormal detection capabilities are analyzed. Preparation for detection of DNA repair gene abnormalities and establishment of methods for detection of DNA repair gene abnormalities The presence of DNA repair gene abnormalities is indicated by the ease of detection of instability. The automatic DNA sequence analysis method was used to establish a simple and stable DNA sequence analysis method. The DNA sequence analysis device is used to analyze the DNA sequence. This method is based on a 2-bit difference and is clearly separated, and a high-performance and easy method is established. This method is used to demonstrate the instability of Japanese families. These symptoms are strongly suspected, and abnormalities In DNA repair genes are now established.