神経線維腫症1型遺伝子異常の蛋白発現ベクターを応用した診断法の確立

神经纤维瘤病1型基因异常蛋白表达载体诊断方法的建立

基本信息

批准号：
08266237
负责人：
松尾雅文
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266237/
关键词：
In vitro翻訳転写点突然変異マイクロサテライトがん遺伝子

项目摘要

巨大な遺伝子あるいは多くのエクソンを有する遺伝子で、遺伝子の中に存在する点突然変異を明らかにすることは極めて困難なことである。そのため、遺伝子異常解析上の難点を克服するため様々な方法が考えられてきている。研究者は遺伝子の異常をDNAを直接解析することにより明らかにするのではなく、遺伝情報の産物である蛋白を解析することにより効率的な遺伝子異常解析システムが確立されると着想した。そして、リンパ球中のmRNAを解析材料として、これを逆転写酵素によりcDNAにかえ、このcDNAをテンプレートしてIn vitroでの転写・翻訳系を用いて蛋白を産生させ、産生された蛋白のサイズの異常を明らかにする解析系を構築してきた。現在、本システムの有用性を検討するため、がんの発生と大きく関与しているDNA修復遺伝子で、その異常検出能について解析している。そして、遺伝子異常検出能を検討する準備段階としてDNA修復遺伝子異常の存在を発見する方法の確立につとめた。そのため、DNA修復遺伝子異常の存在を示唆するマイクロサテライトの不安定性の容易な検出法の確立をはかった。ここでは、自動DNA塩基配列解析方法を応用した簡易なマイクロサテライト不安定性の検出法を確立した。これにはマイクロサテライトを蛍光ラベルしたプライマーを用いてPCR増幅し、これを自動DNA塩基配列解析装置により分離同定した。この方法では2塩基の差も明らかに分離でき、高性能でしかも容易な方法が確立できた。そして、この方法を用いて日本人のがん家系でマイクロサテライト不安定性を示す例を発見することが出来た。この症例では、DNA修復遺伝子の異常が強く疑われ、DNA修復遺伝子の異常を今回確立したIn vitro翻訳系で解析している。

很难识别具有许多外显子基因或基因的基因中存在的点突变。因此，已经考虑了各种方法来克服遗传异常分析的困难。研究人员提出了这样的想法，即将建立一个有效的分析蛋白质的DNA，基因异常，而是建立是遗传信息的产物的有效系统。我们已经构建了一个分析系统，该系统在淋巴细胞中使用mRNA作为分析材料，使用逆转录酶将其转换为cDNA，并将该cDNA用作模板在体外使用转录和翻译系统产生蛋白质，并在体外转化系统，揭示了产生的蛋白质的异常大小。目前，为了研究该系统的有用性，我们正在分析检测DNA修复基因异常的能力，DNA修复基因高度参与癌症的发展。为了准备检查检测基因异常的能力，我们还试图建立一种发现存在DNA修复基因异常的方法。因此，我们已经建立了一种检测微卫星不稳定性的简单方法，这表明存在DNA修复基因异常。在这里，已经使用自动DNA碱基序列分析方法建立了一种检测微卫星不稳定性的简单方法。这是通过使用带有荧光标记的微卫星的底漆进行PCR扩增来完成的，并通过自动DNA核苷酸序列分析装置进行了分离和鉴定。该方法清楚地将两个基础之间的差异分开，并建立了一种高性能和简单的方法。该方法用于发现日本癌症家庭中微卫星不稳定性的例子。在这种情况下，强烈怀疑DNA修复基因的异常，并使用这次我们确定的体外翻译系统分析了DNA修复基因的异常。