神経線維腫症1型遺伝子異常の蛋白発現ベクターを応用した診断法の確立

神经纤维瘤病1型基因异常蛋白表达载体诊断方法的建立

• 批准号: 08266237
• 负责人: 松尾 雅文
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266237/
• 关键词: In vitro翻訳; 転写; 点突然変異; マイクロサテライト; がん遺伝子

巨大な遺伝子あるいは多くのエクソンを有する遺伝子で、遺伝子の中に存在する点突然変異を明らかにすることは極めて困難なことである。そのため、遺伝子異常解析上の難点を克服するため様々な方法が考えられてきている。研究者は遺伝子の異常をDNAを直接解析することにより明らかにするのではなく、遺伝情報の産物である蛋白を解析することにより効率的な遺伝子異常解析システムが確立されると着想した。そして、リンパ球中のmRNAを解析材料として、これを逆転写酵素によりcDNAにかえ、このcDNAをテンプレートしてIn vitroでの転写・翻訳系を用いて蛋白を産生させ、産生された蛋白のサイズの異常を明らかにする解析系を構築してきた。現在、本システムの有用性を検討するため、がんの発生と大きく関与しているDNA修復遺伝子で、その異常検出能について解析している。そして、遺伝子異常検出能を検討する準備段階としてDNA修復遺伝子異常の存在を発見する方法の確立につとめた。そのため、DNA修復遺伝子異常の存在を示唆するマイクロサテライトの不安定性の容易な検出法の確立をはかった。ここでは、自動DNA塩基配列解析方法を応用した簡易なマイクロサテライト不安定性の検出法を確立した。これにはマイクロサテライトを蛍光ラベルしたプライマーを用いてPCR増幅し、これを自動DNA塩基配列解析装置により分離同定した。この方法では2塩基の差も明らかに分離でき、高性能でしかも容易な方法が確立できた。そして、この方法を用いて日本人のがん家系でマイクロサテライト不安定性を示す例を発見することが出来た。この症例では、DNA修復遺伝子の異常が強く疑われ、DNA修復遺伝子の異常を今回確立したIn vitro翻訳系で解析している。

Huge な heritage 伝 son あ る い は more く の エ ク ソ ン を have す る heritage 伝 で, heritage 伝 child の に exist す る point - different を Ming suddenly ら か に す る こ と は extremely め て difficult な こ と で あ る. そ の た め, but 伝 exceptions resolution on の を overcome difficulties す る た め others 々 な method が exam え ら れ て き て い る. Researchers は posthumous son 伝 の abnormal を を DNA direct analytical す る こ と に よ り Ming ら か に す る の で は な く, heritage 伝 intelligence product の で あ る protein を parsing す る こ と に よ り な of unseen rate 伝 child abnormal parsing シ ス テ ム が establish さ れ る think と し た. そ し て, リ ン パ ball In の mRNA を analytical material と し て, こ れ を inverse planning write enzyme に よ り cDNA に か え, こ の cDNA を テ ン プ レ ー ト し て In vitro で の planning to write, double を 訳 department with い て produced を さ せ, produce さ れ た protein の サ イ ズ の abnormal を Ming ら か に す る parsing system を build し て き た. Now, this シ ス テ ム の usefulness を beg す 検 る た め, が ん の 発 と big き く masato and し て い る traces of DNA repair 伝 で, そ の abnormal 検 can に つ い て parsing し て い る. そ し て can, but 伝 abnormal 検 を beg す 検 る prepare Duan Jie と し て traces of DNA repair 伝 child abnormal の is を 発 see す の る method established に つ と め た. そ の た め, DNA repair but 伝 anomalies の exist を in stopping す る マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト の labile の easy な の 検 out method to establish を は か っ た. こ こ で は salt, automatic DNA base with column parsing methods を 応 with し た simple な マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト labile の を 検 out the method to establish し た. こ れ に は マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト を 蛍 light ラ ベ ル し た プ ラ イ マ ー を with い て PCR raised し, こ れ を automatic DNA salt base with column analysis device に よ り separation with fixed し た. こ の way で は 2 poor salt base の も Ming ら か に separation で き, high-performance で し か も easy way な が establish で き た. そ し て, こ の way を with い て Japanese の が ん family で マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト labile を す cases in を 発 see す る こ と が た. Cases こ の で は, DNA repair but 伝 の abnormal strong が く suspected わ れ, DNA repair but 伝 の abnormal を today back to establish し た In vitro turn 訳 department で parsing し て い る.

项目成果

Pramono,Z.A.D.: "Induction of exon skipping of the dystrophin transcript in lymphoblastoid cells by transfecting an antisnse oligodeoxynucleotide complementary to an exon recognition sequence." Biochem.Biophys.Res.Commun. 226. 445-449 (1996)

Pramono，Z.A.D.：“通过转染与外显子识别序列互补的反义寡脱氧核苷酸，诱导淋巴母细胞中肌营养不良蛋白转录物的外显子跳跃。”

Patria, S. Y.: "A case of Becker muscular dystrophy resulting from the skipping of four contiguous exons (71-74) of the dystrophin gene during mRNA maturation." Proc. Assoc. Am. Phys.108. 308-314 (1996)

Patria, S. Y.：“一例贝克型肌营养不良症是由于 mRNA 成熟过程中肌营养不良蛋白基因的四个连续外显子 (71-74) 的跳跃所致。”