ジストロフィンmRNA前駆体のスプライシングに関与する新規タンパクのクローニング

克隆参与肌营养不良蛋白前体 mRNA 剪接的新型蛋白质

• 批准号: 12877124
• 负责人: 松尾 雅文
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877124/
• 关键词: ジストロフィン; スプライシング; RNA結合蛋白; 核タンパク; 核抽出液

ジストロフィンmRNA前駆体のスプライシングに関与する未知の核内タンパクが存在するとの説が提唱され注目されている。しかし、ジストロフィンのスプライシングを特異的に制御するタンパクに関する研究はなく、ジストロフィン異常症研究の未開拓領域として残されたままで、先の説も証明されていない。本研究は、ジストロフィンのスプライシングに関与する核タンパクを世界に先駆けてクローニングするものである。先に私たちはジストロフィン遺伝子のエクソン19の配列内にスプライシング促進配列があり、この配列がスプライシングを制御していることを明らかにしてきた。その制御にはこのスプライシング促進配列に結合するタンパクが大きく関与していることが疑われたので、RNA結合タンパクの精製とその遺伝子のクローニングを行った。スプライシング促進配列からなるFITCでラベルしたRNAを合成し、これに結合する核タンパクをまず精製した。HeLa細胞核抽出液をアニオン交換カラムカラムと逆相カラムにかけスプライシング促進配列に結合するタンパクをアクリルアミド電気泳動上単一のバンドまで精製した。そして、精製した蛋白をマススペクトメトリー解析したが、そのスペクトルパターンに該当するタンパクをコードしている遺伝子は発見されなかった。そこで、先に精製したタンパクをトリプシン処理して断片化した後、それぞれの断片のアミノ酸配列をペプチドシークエンサーで解析した。その結果、精製したタンパクの一部のアミノ酸配列を明らかにすることに成功した。この1部のアミノ酸配列はデータベース内の遺伝子によりコードされているタンパクの一部の配列であり、RNA結合タンパクのクローニングに成功した。現在明らかになったcDNA配列をもとにタンパクを発現させ、その機能を解析すべく準備を進めている。

In front of the mRNA, there is a sound in the nucleus between the unknown and the unknown. In the field of clinical research, the field of research has not been developed, and the field has not been developed. in the field, the field has not been developed, and the field has not been developed. in the field, the field has not been developed. The purpose of this study is to discuss the relationship between the world and the rest of the world. First of all, we need to know how to make sure that we can make sure that we do not know what to do. In order to improve the performance of the system, the system is designed to facilitate the configuration of the system. The combination of the system and the system is related to the performance of the system, and the combination of the system and the RNA is related to the performance of the system. In order to improve the performance of FITC equipment, the synthesis of RNA and the combination of equipment and equipment are required. The nuclear extract of HeLa was used to enhance the performance of the electrophoretic electrophoretic exercise in reverse phase. I don't know what to do, I don't know, I don't know. In the first place, after the fragmentation of the fragments, the fragments were arranged in an acid column, and the analysis was performed. The results show that the results show that you are successful. In the first part of this paper, we know that in the first part of the program, we need to learn how to make a success in the first part of the series. We need to know that there is a lot of success in the first part of the movie, and the combination of RNA and so on is very important. It is now clear that you will be able to prepare for the implementation of the cDNA in the future.