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ジストロフィンmRNA前駆体のスプライシングに関与する新規タンパクのクローニング

克隆参与肌营养不良蛋白前体 mRNA 剪接的新型蛋白质

基本信息

批准号：
12877124
负责人：
松尾雅文
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877124/
关键词：
ジストロフィンスプライシング RNA結合蛋白核タンパク核抽出液

项目摘要

ジストロフィンmRNA前駆体のスプライシングに関与する未知の核内タンパクが存在するとの説が提唱され注目されている。しかし、ジストロフィンのスプライシングを特異的に制御するタンパクに関する研究はなく、ジストロフィン異常症研究の未開拓領域として残されたままで、先の説も証明されていない。本研究は、ジストロフィンのスプライシングに関与する核タンパクを世界に先駆けてクローニングするものである。先に私たちはジストロフィン遺伝子のエクソン19の配列内にスプライシング促進配列があり、この配列がスプライシングを制御していることを明らかにしてきた。その制御にはこのスプライシング促進配列に結合するタンパクが大きく関与していることが疑われたので、RNA結合タンパクの精製とその遺伝子のクローニングを行った。スプライシング促進配列からなるFITCでラベルしたRNAを合成し、これに結合する核タンパクをまず精製した。HeLa細胞核抽出液をアニオン交換カラムカラムと逆相カラムにかけスプライシング促進配列に結合するタンパクをアクリルアミド電気泳動上単一のバンドまで精製した。そして、精製した蛋白をマススペクトメトリー解析したが、そのスペクトルパターンに該当するタンパクをコードしている遺伝子は発見されなかった。そこで、先に精製したタンパクをトリプシン処理して断片化した後、それぞれの断片のアミノ酸配列をペプチドシークエンサーで解析した。その結果、精製したタンパクの一部のアミノ酸配列を明らかにすることに成功した。この1部のアミノ酸配列はデータベース内の遺伝子によりコードされているタンパクの一部の配列であり、RNA結合タンパクのクローニングに成功した。現在明らかになったcDNA配列をもとにタンパクを発現させ、その機能を解析すべく準備を進めている。

The expression of mRNA precursor is related to the existence of unknown nuclear proteins. The study of abnormal diseases is an unexplored field. This study is aimed at exploring ways to improve the quality of services in the world. First, the Splashlink group in the layout of the Eksolen 19 of the Splashlink gene has been promoted, and this layout has been controlled by the Splashlink group. In addition, it is necessary to improve the quality of the products and to improve the quality of the products. To promote the synthesis and purification of RNA, FITC should be used. HeLa cell nuclear extract was purified by reverse phase chromatography, and reverse phase chromatography. In addition to the above, the company has also been involved in the development of new products. The first step is to refine and analyze the fragments and acid sequences. The results of this study were as follows: The first part of the sequence of RNA binding was successfully completed. Now we know that the cDNA sequence is ready for discovery and functional analysis.