神経活動を制御する階層性遺伝子支配の解析

控制神经活动的分层基因控制分析

• 批准号: 08271231
• 负责人: 滝口 正樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08271231/
• 关键词: 可塑性; 海馬; CA1; 長期増強; 長期抑圧; 遺伝子発現; 転写調節因子; サブトラクション

神経活動の中でも特に,記憶・学習等,中長期にわたる活動の達成・維持には,新たに遺伝子誘導およびそれに続く蛋白合成が必須と考えられる。例えば,記憶・学習等に素過程のモデル系として注目される海馬における長期増強においては,複数の転写因子の制御下に多数の標的遺伝子が活性化あるいは抑制されると予想される。これらの標的遺伝子のあるものはそれ自身転写因子をコードする遺伝子である可能性があり,その産物である転写因子はさらに一群の標的遺伝子を制御すると予想される。このような中長期的可塑的変化の基盤をなす階層性遺伝子支配の実体の解明を目的として,ラット海馬スライスCA1領域における長期増強および長期抑圧的に発現が変動する遺伝子の検出を試みた(Geneve大学D.Muller博士らとの共同研究)。従来同系においては得られる試料が微量なことが分子生物学的解析を困難にしてきた。今回,海馬スライスCA1領域細片に由来する微量RNAを用いて,mRNAを増幅しうる手法を開発した。50ng全RNAに由来するpoly(A)RNAをpligo(dT)磁気ビーズに吸着し,5'端,3'端にそれぞれT7,SP6プロモーター配列を有する二重鎖cDNAを合成し,全cDNA群をPCRにより増幅した。digoxigenin標識したアンチセンス鎖RNAを合成し,フィルターに固定した各種マーカーcDNA由来センス鎖RNAにハイブリダイズさせ,各マーカーmRNAレベルの変動を調べた。その結果,長期増強誘発後1.5時間において亜鉛フィンガー型転写調節因子zif268およびbrain-derived neurtrophic factor (BDNF) mRNAの増加が確認された。また,シトクロームオキシダーゼ・サブユニットIII mRNAが長期増強時に増加,長期抑圧時に減少することが明らかになった。また,長期抑圧誘発後1.5時間CA1細片由来センス鎖RNAおよびコントロールCA1細片由来アンチセンス鎖RNAを用いてサブトラクションクローニングを行い,長期抑圧時に誘導される数種のクローンを単離した。

God 経 activities の で も に, memory, learning, etc., medium and long term に わ た の る activities to achieve, maintain に は, new た に heritage 伝 son induced お よ び そ れ に 続 く protein synthesis が must と え ら れ る. Example え ば, memory, learning and other に process の モ デ ル department と し て attention さ れ る hippocampal に お け る strong long-term rights に お い て は, plural の planning write factor の under the system of imperial に most の mark heritage 伝 son が activeness あ る い は inhibit さ れ る と to think さ れ る. こ れ ら の mark heritage 伝 son の あ る も の は そ れ planning write itself factor を コ ー ド す る posthumous son 伝 で あ る possibility が あ り, そ の product で あ る planning write factor は さ ら に traces of a group of の mark 伝 son を suppression す る と to think さ れ る. こ の よ う な plastic variations of medium and long-term の base plate を な す class-based heritage 伝 son govern の be body の interpret を purpose と し て, ラ ッ ト hippocampal ス ラ イ ス CA1 area に お け る strong long-term rights お よ び long-term 圧 suppression に 発 が now - move す る posthumous son 伝 の 検 try out を み た (university of Geneve D.M uller Dr ら と の joint research). 従 to homologous に お い て は have ら れ る sample が trace な こ と が molecular biology analysis を difficult に し て き た. Today back, hippocampal ス ラ イ ス CA1 area fritter に origin す る micro RNA を with い て, mRNA を rights of し う る gimmick を open 発 し た. 50 ng all RNA に origin す る poly real (A) RNA を pligo (dT) magnetic 気 ビ ー ズ に し, 5 ', 3 'end に そ れ ぞ れ T7 has, SP6 プ ロ モ ー タ ー match column を have す る double lock cDNA synthesis し を, full cDNA group を PCR に よ り rights of し た. Digoxigenin logo し た ア ン チ セ ン ス し を lock RNA synthesis, フ ィ ル タ ー に fixed し た various マ ー カ ー cDNA origin セ ン ス lock RNA に ハ イ ブ リ ダ イ ズ さ せ, each マ ー カ ー mRNA レ ベ ル の - motion を べ た. そ の result, 1.5 time after long-term raised strong 発 lure に お い て 亜 lead フ ィ ン ガ ー type planning write adjustment factor zif268 お よ び brain - derived neurtrophic factor (BDNF) mRNA の raised が confirmed requirement by さ れ た. ま た, シ ト ク ロ ー ム オ キ シ ダ ー ゼ · サ ブ ユ ニ ッ ト III mRNA が long-term raised strong に rights, long-term suppression 圧 に reduce す る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, 1.5 time after long-term 圧 発 lure suppression CA1 fritter origin セ ン ス lock RNA お よ び コ ン ト ロ ー ル CA1 fritter origin ア ン チ セ ン ス RNA を lock with い て サ ブ ト ラ ク シ ョ ン ク ロ ー ニ ン グ を い, long-term suppression 圧 に tempted さ れ る several の ク ロ ー ン を 単 from し た.

项目成果

Sonoki T, et al.: "Coinduction of nitric oxide synthase and arginase I in cultured rat peritoneal macrophages and rat tissues in vivo by lipopolysaccharide." J.Biol.Chem.272. 3689-3693 (1997)

Sonoki T 等人：“脂多糖在培养的大鼠腹膜巨噬细胞和大鼠体内组织中共同诱导一氧化氮合酶和精氨酸酶 I”。

Matsuno,F.et al.: "Induction of the C/EBPβ gene by dexamethasone and glucagon in primary-cultured rat hepatocyles" J.Biochem.119. 524-532 (1996)

Matsuno, F. 等人：“在原代培养的大鼠肝细胞中通过地塞米松和胰高血糖素诱导 C/EBPβ 基因”J.Biochem.119 (1996)。

Nagasaki,A.et al.: "Coinduction of nitric oxide synthase, argininosuccinate synthetase, and argininosuccinate lyase in lipopolysaccharide-treated rats : RNA blot, immunohistochemical nanalyses" J.Biol.Chem.271. 2658-2662 (1996)

Nagasaki，A.等人：“脂多糖处理的大鼠中一氧化氮合酶、精氨基琥珀酸合成酶和精氨基琥珀酸裂合酶的共同诱导：RNA印迹、免疫组织化学分析”J.Biol.Chem.271。

Gotoh T. et al.: "The glucocorticoid-responsive gene cascade : activation of the rat arginase gene through induction of C/EBPβ"J. Biol. Chem.. 272. 3694-3698 (1997)

Gotoh T. 等人：“糖皮质激素反应性基因级联：通过诱导 C/EBPβ 激活大鼠精氨酸酶基因”J. Biol. 272. 3694-3698 (1997)

Chowdhury,S.et al.: "CCAAT/enhancer-binding protein β (C/EBPβ) binds and activates while hepatocyte nuclear factor-4 (HNF-4) does not bind but represses the liver-type arginase promoter" Eur.J.Biochem.236. 500-509 (1996)

Chowdhury,S.et al.：“CCAAT/增强子结合蛋白 β (C/EBPβ) 结合并激活，而肝细胞核因子 4 (HNF-4) 不结合但抑制肝型精氨酸酶启动子”Eur.J .生物化学.236。500-509（1996）