分裂酵母複製開始点に結合する核蛋白質複合体

与裂殖酵母复制起点结合的核蛋白复合物

• 批准号: 08274209
• 负责人: 升方 久夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08274209/
• 关键词: 分裂酵母; 複製開始点; 複製開始複合体

1.分裂酵母第2染色体上に3つの複製開始点を同定した。2.染色体上でほぼすべての細胞周期で複製開始するARS2004を用いて複製開始必須領域を解析した。(1)940bpのARS2004の複製に必須な領域I(40bp),II(120bp),III(80bp)を同定した。(2)リンカースキャン法による置換変異の解析からアデニンストレッチが複製に必須であることを示した。(3)アデニンストレッチは二重鎖を開裂しやすい性質よりも蛋白質の結合配列として機能する可能性を示唆した。(4)アデニンストレッチ(40bp)と領域II,IIIのみをベクターに挿入したものが複製能を持つことから、これらの配列が複製開始に必要充分であることを示した。アデニンストレッチを基本形とする配列が繰り返し存在する構造が分裂酵母複製開始点の特徴であり、この様な構造は出芽酵母とは大きく異なるものである。3.出芽酵母複製開始因子の候補であるORC(origin recognition complex)の分裂酵母ホモログ、orp1、orp2遺伝子にtagを組み込んだ融合遺伝子を発現誘導し、免疫沈降法によりこれらの遺伝子産物が相互作用することを検出した。4.分裂酵母複製必須配列とorp1,orp2蛋白との相互作用を検出する実験系を検討中である。5.細胞周期での1回限りの複製制御に関与すると思われるMCM遺伝子のひとつであるnda1の温度感受性変異株を多コピーで抑制する遺伝子として蛋白質りん酸化調節に関与する遺伝子が分離された。

1. The start point of replication on chromosome 2 of mitotic yeast is the same as that on chromosome 3. 2. Chromosome analysis is required for the initiation of replication in the cell cycle. (1)940bp ARS2004 must be replicated in domains I(40bp),II(120bp),III(80bp). (2)The law of the land of the living (3)The ability to bind and align proteins is demonstrated by the nature of the double lock. (4)A copy can be maintained, a copy can be arranged, and a copy can be started. The basic structure of the yeast is characterized by the existence of a split yeast replication start point. 3. The candidate ORC(origin recognition complex) of budding yeast replication initiation factor is used to detect the interaction between the ORC, ORP1, ORP2 gene tags and fusion gene products. 4. Split yeast replication must be coordinated with orp1, orp2 protein interaction. 5. Cell cycle restriction, replication control, and isolation of MCM genes are related to the regulation of protein acidification.

项目成果

升方久夫: "真核生物の複製開始-ヒト細胞と分裂酵母の場合" 細胞工学. 15・1. 41-48 (1996)

Hisao Masukata：“真核生物中的复制起始 - 人类细胞和裂殖酵母的案例”《细胞工程》15・1（1996）。

Yukiko Okuno: "Identification of a predominant replication origin in fission yeast" Nucleic Acids Research. 25・3. 530-536 (1997)

Yukiko Okuno：“裂殖酵母中主要复制起点的鉴定”《核酸研究》25・3（1997）。

Chikashi Obuse: "A replication-enhancing element with transcriptional silencer activity in autonomously replicating human chromosomal fragments" Molecular Biology of the Cell. 7・1. 43-55 (1996)

Chikashi Obuse：“在自主复制人类染色体片段中具有转录沉默活性的复制增强元件”，《细胞分子生物学》7·1（1996）。