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分裂酵母複製開始因子の分離

裂殖酵母复制起始因子的分离

基本信息

批准号：
08680744
负责人：
升方久夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680744/
关键词：
分裂酵母複製開始点自律複製配列複製開始因子

项目摘要

1.分裂酵母第2染色体から分離した自律複製断片(ARS)のうち、3つが染色体上でも複製開始点として機能することを二次元ゲル電気泳動法による複製中間体の解析により示した。2.染色体上でもプラスミド状態でも、ほぼすべての細胞周期で複製開始するARS2004を用いて複製開始必須領域を解析した。(1)940bpのARS2004の複製に必須な領域I(40bp),II(120bp),III(80bp)を同定した。(2)リンカースキャン法による置換変異の解析からアデニンストレッチが複製に必須であることを示した。(3)3つの必須領域のそれぞれ或いは全てを、polyA配列で置換えたものは機能するがpoly(AT)で置き換えたものは機能しないことから、アデニンストレッチは二重鎖を開裂しやすい性質よりも蛋白質の結合配列として機能する可能性が示唆された。(4)アデニンストレッチ(40bp)と領域II,IIIのみをベクターに挿入したものが複製能を持つことから、これらの配列が複製開始に必要充分であることを示した。アデニンストレッチを基本形とする配列が繰り返し存在する構造が分裂酵母複製開始点の特徴であり、この様な構造は出芽酵母とは大きく異なるものである。3.出芽酵母複製開始必須配列に結合し複製開始因子の候補であるORC(origin recognition complex)の分裂酵母におけるホモログ、orp1,orp2遺伝子にtagを組み込んだ融合遺伝子を発現誘導し、免疫沈降法によりこれらの遺伝子産物が相互作用することを検出した。4.分裂酵母複製必須配列とorp1,orp2蛋白との相互作用を検出する実験系を検討中である。

1. Mitotic yeast chromosome 2 chromosome isolation autonomic replication fragment (ARS) DNA fragment, the starting point of DNA replication on chromosome 3, the starting point of DNA replication on chromosome 3, the starting point of DNA replication on chromosome 3, and the starting point of DNA replication on chromosome 2 of Saccharomyces cerevisiae. two。 The replication of the cell cycle on the chromosome must be analyzed by domain analysis at the beginning of ARS2004 replication. (1) 940bp ARS2004 replication must be identical to domain I (40bp), II (120bp), and III (80bp). (2) it is necessary to verify that the copy of the copy must be properly displayed. (3) it is necessary to have a complete or complete response in the field, and the configuration of the polyA configuration requires that the poly (AT) be able to operate in the presence of both, and the possibility of the combination of the combination of the protocol and the combination of the two. (4) in the field of 40bp, it is necessary to fully verify that it is necessary to make a full copy of the data in the field II,III. In the basic configuration, there is a special starting point for the production of split yeast, which is used to produce budding yeasts. 3. At the beginning of the budding yeast cycle, it is necessary to combine the replication starting factor, the ORC (origin recognition complex) start factor, the mitotic yeast fragment, the orp1,orp2 gene, the tag gene, the fusion plasmid, and the immunoprecipitation method to detect the interaction between the two substrates. 4. The cleavage yeast yeast must be equipped with orp1,orp2 protein interaction to express the gene in the yeast cell line.