温熱耐性克服のための基礎研究

克服耐热性的基础研究

• 批准号: 09255265
• 负责人: 大塚 健三
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255265/
• 关键词: 温熱耐性; Hsp40; Hsp70; DnaJ相同体; 熱ショック蛋白質

1.ヒトHsp40遺伝子の構造および発現調節機構を明らかにした。転写開始点はATG翻訳開始コドンから47bp上流にあった。プロモーター解析の結果、熱ショックによるHsp40の誘導は、8つの連続した(A/G)GAANモチーフからなる熱ショックエレメント(HSE,heat shock element)に依存することが示された。このHSEに熱ショック転写因子であるHSF(heat shock factor)1が結合することも判明した。なお、第一イントロンにもHSE様の配列が存在しているが、これは熱ショック応答には関与していないことがわかった。このようなことからHsp40は真の熱ショック蛋白質であることが証明された。2.熱ショック蛋白質(Hsp)の温熱耐性における役割を直接的に証明するためには、特定のHspを条件的に高発現または発現抑制させる実験系が有効である。その1つにTet-on遺伝子発現系がある。まずHeLa細胞にpTet-onプラスミドを導入した。得られたTet-on HeLa細胞に、哺乳動物のDnaJ(Hsp40)相同体のひとつであるHSDJcDNAをpTREヴェクターに組み込んだプラスミドを導入して、doxycycline添加でHSDJを高発現する細胞株を得た。HSDJの発現はdoxycycline濃度依存的であり、約3倍の誘導がみられた。今後このほかに、Hsp70やHsp40についても条件的に高発現または発現抑制する細胞株を単離し、これらの細胞株を用いて各Hspの温熱耐性における役割を解析していく。

1. Youdaoplaceholder0 Hsp40 remains 伝 sub-<s:1> structure および occurrence regulating mechanism を brightness ら に に た た. Youdaoplaceholder0 write the starting point 転 ATG turn 訳 to start コド ら ら47bp upstream にあった. プ ロ モ ー タ ー parsing の results, hot シ ョ ッ ク に よ る Hsp40 の induced は, 8 つ の even 続 し た (A/G) GAAN モ チ ー フ か ら な る hot シ ョ ッ ク エ レ メ ン ト (HSE, heat shock element) に dependent す る こ と が shown さ れ た. こ の HSE に hot シ ョ ッ ク planning write factor で あ る HSF (heat shock factor) 1 が combining す る こ と も.at し た. な お, first イ ン ト ロ ン に も HSE others の match column が exist し て い る が, こ れ は hot シ ョ ッ ク 応 answer に は masato and し て い な い こ と が わ か っ た. <s:1> ような ような と ら らHsp40 <s:1> true <s:1> heat ショッ <s:1> <s:1> protein である とが とが とが とが proof された. 2. Hot シ ョ ッ ク protein (Hsp) の warm patience に お け る "を directly cut に prove す る た め に は, high specific の Hsp を conditions に 発 now ま た は 発 now inhibit さ せ る be が 験 department have sharper で あ る. Youdaoplaceholder0 に 1 にTet-on 伝 offspring of がある. Youdaoplaceholder0 HeLa cells にpTet-onプラス ドを ドを introduction た た. Have ら れ た Tet - on HeLa に, mammals の DnaJ (Hsp40) body same の ひ と つ で あ る HSDJcDNA を pTRE ヴ ェ ク タ ー に group み 込 ん だ プ ラ ス ミ ド を import し て, doxycycline add で HSDJ を high 発 now す る cell lines を た. HSDJ shows <s:1> doxycycline concentration-dependent であ がみられた and approximately 3 times the <s:1> induction がみられた. Future こ の ほ か に, Hsp70 や Hsp40 に つ い て も conditions of high に 発 now ま た は 発 now inhibit す る cell lines を 単 し, こ れ ら の cell lines を with い て the Hsp の warm patience に お け る service cut を parsing し て い く.

项目成果

大塚健三: "ストレス応答と老化・寿命" 放射線科学. (印刷中).

Kenzo Otsuka：“压力反应和衰老/寿命”放射科学（正在出版）。

Hata,M.et al.: "Characterization of HSE sequence in human Hsp40 gene : structural and promoter analysis." Biochim.Biophys.Acta. (in press).

Hata,M.et al.：“人类 Hsp40 基因中 HSE 序列的表征：结构和启动子分析。”

Kaneko,R. et al.: "Relationship between Hsp40 synthesis and the development of thermotolerance in murine tumor in vivo." Int.J.Hyperthermia. 13. 507-516 (1997)

金子，R.

Ohtsuka K.: "Guidebook to Molecular Chaperones and Protein-Folding Catalysts." Edited by MJ Gething,Oxford University Press, 554 (1997)

Ohtsuka K.：“分子伴侣和蛋白质折叠催化剂指南”。

Michels,AA.et al.: "Hsp70 and Hsp40 chaperone activities in the cytoplasm and the nuclens of mammoclian cells" J.Biol.Chem.272. 33283-33289 (1997)

Michels，AA. 等人：“哺乳动物细胞的细胞质和核中的 Hsp70 和 Hsp40 伴侣活性”J.Biol.Chem.272。