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ロイシンジッパー様配列を有するHIV-Ivpr蛋白の細胞分化と増殖に及ぼす影響

亮氨酸拉链样序列的HIV-Ivpr蛋白对细胞分化和增殖的影响

基本信息

批准号：
09258226
负责人：
間陽子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

HIV-1vpr遺伝子産物はウイルス感染効率の上昇及び潜伏感染細胞でのプロウイルスの活性化を導くなど、AIDS発症のkey factorとして注目されている。本研究では、Vpr蛋白による細胞増殖抑制機構の解析した。HIV-1感染性DNAクローンpNL432由来のvpr遺伝子の野性型と欠失および点変異体を高度発現ベクターに挿入後、種々の細胞株に導入し過剰発現させた。HeLAおよびCOS1等の霊長類細胞の細胞周期はG2期でarrestされ、増殖能の低下が認められた。G2 arrest能の発揮には、蛋白質全体の高次構造、特にロイシンジッパー様配列の74位及び81位のIIeの保存が重要であった。また、N末端のアルギニンに富む領域の欠失変異体は、G2arrest能を消失しているにも関わらず細胞増殖抑制効果が観察された。この導入細胞を各種細胞周期マーカーを用いて染色した結果、G1 arrestによるアポトーシスであった。以上から、vpr遺伝子産物によって、異なる2つの細胞増殖抑制機構が誘導されることが明らかとなった。Vpr蛋白発現HeLa細胞の培養上清を、vpr非導入細胞に添加し細胞増殖に及ぼす効果を解析した。様々な細胞において〔^3H〕-thymidineの取り込み量がコントロールベクター導入細胞のそれより低かった。一方、Flow cytometryを用いて細胞周期を解析したところ、G2 arrestは認められなかった。HIV-1分離株間で保存されている、67位のLeu及び74位のIIeをAlaに置換した変異体(L67/I74A)をHeLa細胞に導入すると、野性型より強いG2 arrestを誘導したが、その培養上清は非導入細胞の増殖を抑制しなかった。以上のように、Vpr蛋白のG2 arrest能はL67/I74A変異により増強するにも係わらず、培養上清を介する細胞増殖抑制活性は消失することから、Vpr蛋白発現細胞の培養上清を介する細胞増殖抑制はG2 arrestとは異なる機序を通じて発揮される可能性が示唆された。

HIV-1 vpr genetic products have attracted attention as key factor in the development of AIDS by increasing the efficiency of infection and activating proteins in latently infected cells. In this study, we analyzed the mechanism of cell proliferation inhibition by Vpr protein. HIV-1 infectious DNA pNL432 is highly expressed in wild-type, mutant and mutant strains after introduction into the cell line. The cell cycle of HeLa and COS1 cells was arrested in G2 phase, and the proliferation ability was reduced. The development of G2 arrest is important for the preservation of the higher-order structure of the whole protein, especially the 74-position and 81-position IIe of the protein sequence. The N-terminal region is rich in mutant and G2 arrest genes, and the N-terminal region is rich in mutant and G2arrest genes. The cell cycle is introduced into the cell cycle. The cell growth inhibition mechanism induced by the above two kinds of gene products Vpr protein expression in culture supernatant of HeLa cells, vpr non-introduced cells, cell proliferation, and fruit analysis The cells were introduced with thymidine. One side, Flow cytometry, cell cycle analysis, G2 arrest, recognition HIV-1 isolates were preserved and transformed into HeLa cells with Leu at position 67 and IIe at position 74 (L67/I74A), and wild type G2 arrest was induced and inhibited in culture supernatant of non-transformed cells. These results indicate that Vpr protein G2 arrest can inhibit the proliferation of cells mediated by L67/I74A, and that it is possible to inhibit the proliferation of cells mediated by Vpr protein in culture supernatant.