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活性化シグナルと免疫制御異常

激活信号和免疫失调

基本信息

批准号：
12051232
负责人：
渡邊武
金额：
$ 58.5万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではB細胞抗原受容体(BCR)からのシグナルによるB細胞活性化の負の制御、特に未熟B細胞ではBCR刺激によるアポトーシスの分子機構について解析を行った。未熟B細胞WEHI231細胞ではBCRシグナルによりアポトーシスが誘導される。その際、新規のタンパクの合成が必須であり、そのタンパクがミトコンドリアを標的とすることを見いだした。この新規タンパクのcDNAを単離し、iWH37と名付けた。iWH37はアポトーシスの際にミトコンドリアに局在し、VDAC, Bakと結合する。iWH37をCos7細胞に強発現すると、ミトコンドリアにiWH37が局在した場合は細胞死が誘導された。WEHI231細胞ではiWH37はBCR刺激により誘導される。iWH37cDNAをWEHI231細胞に一時的に発現させるとミトコンドリア膜電位の低下が誘導される。これらの結果から、iWH37は未熟B細胞の細胞死に関与する新規分子と考えられた。BCR刺激したWEHI231細胞の細胞抽出物を抗iWH37抗体で免疫沈降し、その沈降物を電気泳動して抗リン酸化チロシン抗体でブロットすると80kDa,20-25kDaのリン酸化タンパクがiWH37に結合して沈降してくることがわかった。現在これらの性状について解析中である。また、SHP-1を介するBリンパ球活性化の負の制御機構について解明した。BCR単独ではSHP-1を活性化できず、抑制性共受容体の存在下でBCR架橋がおこることによりはじめてSHP-1の活性化がおこった。さらに、SHP-1はIga/Igbそのものやシグナル分子SykやBLNK/SLP-65のリン酸化を負に制御したが、Lynは制御しなかった。Bリンパ球においてSHP-1は抑制性共受容体により活性化され、BCRそのものやその近傍のシグナル分子のリン酸化を負に制御することによりBリンパ球の活性化を負に制御することが明らかとなった。さらに、IgGとIgMのキメラを用いた検討から、IgGの細胞内領域がCD22のリン酸化を阻害することが明らかとなった。以上から、IgGの細胞内領域がCD22によるシグナル阻害を解除し、その結果、IgG-BCRはIgM-BCRやIgD-BCRに比べ効率よくシグナルを伝達し、IgG陽性細胞の効率よい活性化と効率よいIgGの産生がおこると考えられた。これまで、免疫グロブリンのクラス特異的なBCRシグナル制御の存在は知られていなかったが、今回の結果でその存在がはじめて明らかとなった。

In this study, we analyzed the molecular mechanisms of B cell antigen receptor (BCR) activation, especially immature B cell activation. Immature B cells WEHI231 cells were induced by BCR. The new rules and regulations must be followed. The new code is called iWH37. iWH37 is a combination of VDAC, Bak, and Bak. iWH37 Cos7 cells are strongly expressed, and iWH37 cells are strongly induced. WEHI231 cells were induced by BCR stimulation. iWH37 cDNA was detected in WEHI231 cells and induced in the decrease of membrane potential. iWH37 is a new molecular marker for immature B cells. BCR stimulated WEHI231 cell extracts with anti-iWH37 antibodies, and electrophoresis of the sediments. Anti-iWH37 antibodies bind to iWH37 at 80kDa and 20-25kDa. Now the character is analyzed. The negative control mechanism of ball activation is explained by SHP-1. In the presence of BCR inhibitor, SHP-1 is activated by BCR bridging. In addition, SHP-1 and Iga/Igb are the two main molecules of Syk and BLNK/SLP-65. SHP-1 is an inhibitor of co-receptor activation, and BCR is a member of the family of molecules that are negatively controlled by BCR activation. In addition, IgG and IgM can be used to inhibit CD22 in the intracellular domain. The results showed that IgG-BCR and IgD-BCR had higher activity than IgG-BCR and IgG-BCR, and IgG positive cells had higher activity than IgG-BCR. The existence of the immune system is not known, but the existence of the immune system is not known.