シア・ストレス応答性cDNAの包括的単離と動脈硬化における役割の解明

全面分离乳木果应激反应 cDNA 并阐明其在动脉硬化中的作用

• 批准号: 14013040
• 负责人: 山下 静也
• 金额: $ 4.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013040/
• 关键词: 血管内皮; shear stress; Rho small GTPase

マイクロビーズ上に培養したヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)にshear stressを負荷して作製した差分化cDNAライブラリーより、低分子量G蛋白質のコンセンサス配列を持ち、Rho familyと非常に高いホモロジーを有するクローン、Recs28を単離した。精製したRecs28の蛋白質にGTPγSは結合するがATPは結合しなかった。また、GTPγSの結合は共存する過剰のGTP、GDPで抑制されるが、ATPでは抑制されず、Recs28はGTP、GDPと特異的に結合することが示された。Rho familyは種々の細胞で細胞骨格系並びに細胞間接着を制御していることが知られているので、Recs28をHUVEC内に過剰発現させて、この2点について検討した。Recs28またはRecs28の活性型変異体を発現させたHUVECでは、phorbolesterによるstress fiber形成刺激下においても、著しいstress fiberの形成抑制が認められた。一方、Recs28の不活性型変異体にはこの抑制作用は無かった。monolayerに培養したHUVECにphorbol esterの刺激を加えると、大きな細胞間隙を形成し、形質膜上の同部位でVE-cadherinの消失が見られるが、Recs28を発現させたHUVECのmonolayerでは、光学顕微鏡レベルで見られる細胞間隙は認められず、VE-cadherinも細胞接着面に途切れること無く線状に染色された。また、HUVECを二重ウェルの膜上に培養し、細胞間隙の指標であるデキストランの透過量を測定したところ、controlのHUVECではphorbol ester刺激により著しく透過性が上昇するのに対し、Recs28を発現させたHUVECでは透過性の上昇は全く見られず、バリア機能は維持されたままであった。

Umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro were cultured under shear stress, and differentially differentiated cDNA fragments, low molecular weight G protein protein, and Rho family were isolated. Refined Recs28 protein binding to ATP The binding of GTPγS to GTPγS was inhibited by ATP γ S and GTP γ S was inhibited by Recs28. Rho family is a family of cells that grow in cells, osteoblasts, and intercellular connections. Recs28 and Recs28 are active variants of HUVEC, which are stimulated by stress fiber formation and inhibited by stress fiber formation One side, Recs28 and inactive type of allogeneic, inhibitory effect is not observed. HUVEC monolayer culture was stimulated by phorbol ester, and VE-cadherin disappeared in the same position on the plasma membrane. Recs28 appeared in the monolayer culture. Optical microscopy showed that VE-cadherin disappeared in the cell gap. HUVECs were cultured on the membrane, and the cell gap index was measured. In response to phorbol ester stimulation, HUVECs increased their permeability, and Recs28 was detected. In response, HUVECs increased their permeability, and their function was maintained.

项目成果

Yoshisue H, Yamashita S, et al.: "A large scale isolation of shear stress-responsive genes from cultured human endothelial cells by preparation of a subtracted cDNA library"Atherosclerosis. 162(2). 323-334 (2002)

Yoshisue H、Yamashita S 等人：“通过制备消减 cDNA 文库，从培养的人内皮细胞中大规模分离剪切应力响应基因”动脉粥样硬化。

Nojima H, Yamashita S, et al.: "Atherosclerosis : Risk Factors, Diagnosis, and Treatment (Eds : GM Kostner & KM Kostner) Isolation and characterization of non-uniform shear stress-responsive genes, RECS"Monduzzi Editore. 221-225 (2002)

Nojima H、Yamashita S 等人：“动脉粥样硬化：危险因素、诊断和治疗（编辑：GM Kostner）