シア・ストレス応答性cDNAの包括的単離と動脈硬化における役割の解明

全面分离乳木果应激反应 cDNA 并阐明其在动脉硬化中的作用

• 批准号: 12204071
• 负责人: 山下 静也
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204071/
• 关键词: シア・ストレス; 血管内皮細胞; 粥状動脈硬化; 差分化cDNAライブラリー; endothelin-1; MCP-1; thrombomodulin; TGF-β

【目的】粥状動脈硬化の初期病変である脂質の血管内皮下沈着は、血流が大きく変化する血管の湾曲部や分岐部に好発することが知られている。このことは血流の血管内皮に及ぼす物理的な力、即ちずり応力(シア・ストレス)のかかり方が粥状動脈硬化の発生に関与している可能性を示唆する。近年、シア・ストレスが血管内皮細胞の遺伝子発現を変化させ、形態や機能を調節していることが明らかになってきた。本研究の目的は乱流シア・ストレスを培養血管内皮細胞に負荷し、発現が変動する遺伝子を差分化cDNAライブラリー作成法を用いて包括的にクローニングし、それらの機能を解析することにより、動脈硬化病変における役割を解明することである。【方法と結果】乱流のシア・ストレスを負荷したヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)より作成した差分化cDNAライブラリー中、0.4kb以上のインサートが挿入されているクローンを560個選んでノーザン解析を行ったところ、64個の遺伝子でシア・ストレス依存性の発現増加を確認した。このうち、新規遺伝子が15個、動脈硬化との関連が報告されていないものが35個含まれており、またシア・ストレス依存性発現誘導の報告があるendothelin-1、MCP-1、thrombomodulin、TGF-β、HB-EGFの5つも含まれていた。ヒト大動脈組織でnorthern blottingを行ったところ、動脈硬化初期病変に比べ進行病変で、発現が有意に増加しているものを5クローン見出した。発現量が少なくnorthern blottintで確認できなかったものについては、RT-PCRにて検討中である。また、発現が確認できたこれらについては、現在抗体を作成中であり、今後免疫染色により細胞内局在や発現量の異常等を検討する。また、蛋白発現用ベクターに組み込み、HUVECに強制発現させることによる形態の変化、細胞接着系、脂質輸送系、分泌能、単球の遊走能などに及ぼす影響について検討する予定である。

【 objective 】 atherogenic dyslipidemia disease - early の で あ る lipid の intravascular subcutaneous shen は, blood flow が big き く variations change す る vascular の bay music department in や department good に 発 す る こ と が know ら れ て い る. こ の こ と は の endothelial に blood flow and ぼ す な of physical force, namely ち ず り 応 force (シ ア · ス ト レ ス) の か か り party が atherogenic dyslipidemia の 発 raw に masato and し て い を る possibility in stopping す る. In recent years, シ ア · ス ト レ ス が endothelial cells の heritage 伝 son 発 を now - the さ せ や function, form を adjust し て い る こ と が Ming ら か に な っ て き た. Purpose this study の は turbulence シ ア · ス ト レ ス を に load し culture endothelial cells, 発 が now - move す る heritage 伝 son を differencing cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を consummate method using い て including に ク ロ ー ニ ン グ し, そ れ ら の function analytical す を る こ と に よ り, arteriosclerosis disease - に お け cut を る service interpret す る こ と で あ る. Turbulence の way と results 】 【 シ ア · ス ト レ ス を load し た ヒ ト umbilical 帯 vein endothelial cells (HUVEC) よ り made し た differencing cDNA ラ イ ブ ラ リ ー, more than 0.4 KB の イ ン サ ー ト が scions into さ れ て い る ク ロ ー ン を 560 selected ん で ノ ー ザ ン parsing line を っ た と こ ろ, 64 の but 伝 で シ ア · Youdaoplaceholder0 dependency <s:1> increases を confirms た. こ の う ち, new rules but 伝 が 15, arteriosclerosis と の masato even が report さ れ て い な い も の が contains 35 ま れ て お り, ま た シ ア · ス ト レ ス dependency 発 now induced の report が あ る endothelin - 1, MCP - 1, thrombomodulin, TGF beta, HB EGF の 5 つ も containing ま れ Youdaoplaceholder0 て た. Line ヒ ト aortic tissue で northern blotting を っ た と こ ろ, early atherosclerosis disease - に than べ for disease - で, 発 now が intentionally に raised し て い る も の を 5 ク ロ ー ン see out し た. 発 now fewer が な く northern blottint で confirm で き な か っ た も の に つ い て は, rt-pcr に て 検 beg in で あ る. ま た, 発 が now confirmed で き た こ れ ら に つ い て は, antibody を now done で あ り, future immune dyeing に よ り cells inside bureau in や 発 amount is の anomalies such as を beg す 検 る. ま た, protein 発 current ベ ク タ ー に group み 込 み, HUVEC に forced 発 now さ せ る こ と に よ る form の variations, the cells then, lipid transport system, can secrete, 単 ball の can wander な ど に and ぼ す influence に つ い て beg す 検 る designated で あ る.

项目成果

K.Hirano S.Yamashita et al.: "Expression of human scavenger receptor class B type I (SR-BI) in cultured human monocyte-derived macrophages and atherosclerotic lesions"Circ Res. 8. 108-116 (1999)

K.Hirano S.Yamashita 等人：“人 B 型清道夫受体 I 型 (SR-BI) 在培养的人单核细胞衍生巨噬细胞和动脉粥样硬化病变中的表达”Circ Res。

N.Ouchi,S.Kihara et al: "Adipocyte-derived plasma protein, adiponectin, suppresses lipid accumulation and class A scavenger receptor expression in human monocyte-derived macrophages"Circulation. 103. 1057-1063 (2001)

N.Ouchi、S.Kihara 等人：“脂肪细胞来源的血浆蛋白，脂联素，抑制人单核细胞来源的巨噬细胞中的脂质积累和 A 类清道夫受体表达”循环。

T.Nakagawa,,S.Yamashita et al.: "Oxidized LDL increases and interferon-g decreases expression of CD36 in human monocyte-derived macrophages"Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18. 1350-1357 (1998)

T.Nakakawa,,S.Yamashita 等人：“氧化 LDL 增加，干扰素 g 减少人单核细胞来源的巨噬细胞中 CD36 的表达”Arterioscler Thromb Vasc Biol。

A.Nakata,M.Nishida et al.: "CD36, a novel receptor for oxidized low density lipoproteins, is highly expressed on lipid-laden macrophages in human atherosclerotic aorta"Arterioscler Thromb Vasc Biol. 19. 1333-1339 (1999)

A.Nakata、M.Nishida 等人：“CD36 是氧化低密度脂蛋白的一种新型受体，在人动脉粥样硬化主动脉中的脂质巨噬细胞上高度表达”Arterioscler Thromb Vasc Biol。

K.Miyaoka,T.Kuwasako et al: "CD36 deficiency associated with insulin resistance"Lancet. 357. 686-687 (2001)

K.Miyaoka、T.Kuwasako 等：“CD36 缺乏与胰岛素抵抗相关”《柳叶刀》。