シア・ストレス応答性cDNAの包括的単離と動脈硬化における役割の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)をマイクロビーズ上に培養し、培養液を撹拌し、多方向からshear stressを負荷した。これらの細胞より作成した差分化cDNAライブラリー中、0.4kb以上のインサートが挿入されているクローンを560個選んでノーザン解析を行ったところ63個の遺伝子でshear stress依存性のRNA転写増加を確認した。このうち既知の遺伝子は50種あり、endothelin-1、MCP-1、thrombomodulin、TGF-β、HB-EGFなどshear stress依存性発現誘導の報告があるものが7種、動脈硬化と関連があるものが9種含まれていた。新規遺伝子は13種単離され、その中に低分子量G蛋白質コンセンサス配列を持つクローンが2個存在し、このうち1つはRho familyのRhoAと61%、Rac1と62%、Cdc42と63%のホモロジーを持つものであった。この2つの分子について、多方向性shear stressと平行平板培養系で一方向性層流shear stressの影響との比較検討を行ったところ、Rho familyとホモロジーを有する分子はどちらのstressでも発現上昇が見られたが、一方向性層流shear stressでの発現上昇の方がより顕著であった。一方、もう一つの分子は多方向性shear stressで著しい発現上昇が見られたが、一方向性層流shear stressでは全く反応を示さなかった。また、shear stress作動性の報告のある既知の遺伝子群の中で、MCP-1、HB-EGF、TGF-βなどは両方のstressで発現上昇が見られ、endothelin-1、PAI-1などは多方向性shear stressでのみ強い発現上昇が認められた。異なるshear stressに対する反応性の差異で2群に分類することができた。