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メチル化抵抗性ウイルス感染に対する宿主応答

宿主对甲基化抗性病毒感染的反应

基本信息

批准号：
14021139
负责人：
松尾光一
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021139/
关键词：
レトロウイルスメチル化転写潜伏感染ウイルスベクター

项目摘要

レトロウイルスの遺伝子発現は、感染した宿主細胞による不活性化を受ける。レトロウイルスの潜伏感染機構の解明とレトロウイルスベクターの発現低下という欠点の克服を目指し、われわれは、マウス白血病ウイルス(MLV)由来のレトロウイルスベクターから、宿主のメチル転移酵素の基質となるDNA配列「CpG」を塩基置換により可能な限り除去して「メチル化され得ない変異ウイルスベクター」を構築することにした。これにより宿主細胞がゲノムに組み込まれたウイルス遺伝子を不活性化する機構を、DNAのメチル化によるもとそれ以外に区別して明らかにしたい。まず、マウス白血病ウイルス由来のレトロウイルスベクターpBabe puroを出発材料とし、2つの機能部分について、メチル化の標的となるCpGを別の塩基に置換する作業を進めた。(1)puromycin耐性遺伝子は199個のアミノ酸からなる。そこで、コードされるアミノ酸配列を変えないように102個のCpGをすべて他の塩基配列に変更し、長さ30塩基のオリゴヌクレオチド44本にわけて合成した。全長の塩基配列を決定したあと、発現ベクターに挿入して細胞にpuromycin耐性を付与するかを検討した。(2)Long terminal repeat(LTR)は転写調節を担うエンハンサー・プロモータを含む。LTR領域をさらにエンハンサー領域、プロモータ領域、R領域、U5領域に分け、各領域内をCpG-freeにしてLTRの転写活性を測定した。今後、これらの変異の統合などにより、CpG-free LTRや「メチル化され得ない変異ウイルスベクター」の構築を進める。

The expression of DNA in the infected host cells is inhibited by inactivation. The mechanism of latent infection in leukemia is to solve the problem of low expression and to overcome the problem of low expression. The origin of leukemia (MLV) is to solve the problem of low expression and to overcome the problem of low expression. The host is to solve the problem of low expression and to eliminate the possibility of CpG base substitution in the matrix of DNA transfer enzyme. The host cells are divided into two groups: one is the DNA, the other is the DNA. 2. The functional part of the production process, the target of the production process, and the work of CpG substitution. (1) There were 199 puromycin resistant genes. In addition, there are 102 CpG residues in the acid sequence, and 44 CpG residues in the base sequence. The length of the gene is determined by the expression of puromycin. (2)Long terminal repeat(LTR) is included. LTR domain is divided into three domains: the first domain, the second domain, the third domain, and the fourth domain. From now on, the construction of "integration of different types of products" and "CpG-free LTR" will be further developed.