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がん化に伴うDNA複製開始制御の変化

与癌变相关的 DNA 复制起始控制的变化

基本信息

批准号：
14028041
负责人：
水島徹
金额：
$ 4.8万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028041/
关键词：
DNA複製 ORC Cdc6p ATP がん ATPase

项目摘要

ヒト正常細胞の核粗抽出液中にORC、及びCdc6PのATPase活性の促進因子が存在するか否かを調べた。粗抽出液をカラムクロマトグラフィーで調べたところ、ORC、及びCdc6PのATPaseに対する促進活性の複数のピークが観察された。がん細胞の核抽出液も同様に解析したとこと、正常細胞とは違うカラムクロマトグラフィーパターンを示した。その内、がん細胞で活性が低下しているORCのATPase活性の促進因子の精製に成功した。アミノ酸配列からこの因子(ORC ATPase Stimulating Factor 1, OAS1と命名)が新規蛋白質であることが明らかになった。以上の結果は、細胞のがん化に伴い、ORC、及びCdc6PのATPase活性が変化することが、がん細胞の異常な複製開始に関与しているという新しい可能性を示している。我々は、ORCのATP結合に関し、フィルター結合アッセイ法を確立しその生化学的性質を解析した。その結果、Orc5pは、Orc1pとは関係なく高い親和性(Kd値は約10nM)でATPと結合できるのに対し、Orc1pはOrc5pにATPが結合しているときは、高い親和性(Kd値さ約10nM)でATPと結合できるが、OrcsPにATPが結合していないときにはその親和性が大きく低下することを発見した。またOrc1pに対するATP結合はorigin DNAによって促進されるのに対し、Orc5pに対するATP結合はorigin DNAによって影響を受けなかった。さらに、Orc5pとATPとの複合体が非常に安定であるのに対し、Orc1pとATPとの複合体は不安定であることを見出した。

The presence or absence of promoter factors for ORC and CdC6P ATPase activity in crude nuclear extracts of normal cells The crude extract was found to promote the activity of the enzyme, ORC and Cd6P. The nuclear extract of the cell was analyzed in the same way as the normal cell. The activity of ORC ATPase and the purification of the promoter were successful. ORC ATPase Stimulating Factor 1 (OAS1) is a new protein. The above results indicate the possibility that the activity of ORC and Cdc6P ATPase in cells may change, and that abnormal replication in cells may begin. We analyzed the biochemical properties of ATP binding in ORC by using the ATP binding method. The results showed that Orc5p and Orc1p had high affinity (Kd = about 10nM) for ATP binding, Orc1p and Orc5p for ATP binding, high affinity (Kd = about 10nM) for ATP binding, Orc5p for ATP binding, and high affinity (Kd = about 10nM) for ATP binding. Orc1p is responsible for ATP binding to origin DNA, and Orc5p is responsible for ATP binding to origin DNA. Moreover, it can be seen that the complex of Orc5p and ATP is very stable, but the complex of Orc1p and ATP is unstable.