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脂肪細胞分化におけるclonal expansionと分化シグナルの切り換え機構

脂肪细胞分化中的克隆扩增和分化信号转换机制

基本信息

批准号：
14033242
负责人：
今川正良
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14033242/
关键词：
脂肪細胞肥満細胞分化 Rho 転写因子 clonal expansion 糖尿病生活習慣病

项目摘要

肥満に直結する脂肪細胞分化の重要な制御因子として、PPARγ(Peroxisome Proliferator-Activates Receptorγ)やC/EBP(CCAAT/Enhancer-Binding Protein)ファミリーが同定された。しかし、これらが発現するのは、脂肪細胞分化の中期であり、脂肪細胞分化の最も初期における変化は未だ不明な点が多い。脂肪細胞の分化には、細胞がconfluentに達した後、clonal expansionというステップを経る必要が有り、その後分化の過程に進むことが知られている。しかし、この切り換えスイッチの機構については全くわかっていない。最近我々は、脂肪細胞分化初期すなわちclonal expansionの時期に発現が増加する因子として、Rhoファミリーの一つであるTCLを同定した。そこで脂肪細胞分化初期におけるTCLの機能解明を目的とし以下のことを明らかとした。1)TCLの発現により発現量が増加する因子をPCRサブトラクション法を用いて単離した。それらの脂肪細胞分化過程初期における発現量変化について検討したところ、TCLと同様に分化初期に発現量が一過性に増加するものや、経時的に発現が増加していくもの、減少していくものなど様々な発現パターンが得られた。2)活性型、不活性型および野生型TCLを発現する3T3-L1細胞のstable transformantsを樹立した。樹立した細胞を用いてCRIB assay(Cdc42/Rac interacting binding assay)を行なった結果、活性型および野生型TCLがCdc42やRac1と同様にPAK1由来のCRIB domainに結合することを明らかとした。3)上記のstable transformantsについて誘導誘導実験を行ったところ、不活性型TCL発現細胞の分化能が抑制されることが明らかとなった。4)Pull Down Assayおよび免疫沈降法によりTCLと相互作用する因子の存在を明らかにした。

PPARy (Peroxisome Proliferator-Activates Receptorγ) and C/EBP(CCAAT/Enhancer-Binding Protein) are important regulatory factors for adipocyte differentiation. There are many unknown points in the middle and early stages of adipocyte differentiation. Adipose cell differentiation, cell confluence, clonal expansion, and postdifferentiation are necessary processes.しかし、この切り换えスイッチの机构については全くわかっていない。Recently, we have found that the factors that increase the development of adipocyte differentiation at the initial stage of adipocyte expansion are the same as those of Rho. In the early stages of adipocyte differentiation, the function of TCL was clarified. 1) The factor that increases the detection amount of TCL is used in PCR. In the early stages of adipocyte differentiation, the amount of adipocyte development increased transiently, and the amount of adipocyte development decreased transiently. 2)Active, inactive, and wild-type TCL cells were developed and stable transformants were established in 3T3-L1 cells. CRIB assay(Cdc42/Rac interacting binding assay) was used to determine the binding results of active and wild-type TCLs, Cdc42 and Rac1, and PAK1 derived CRIB domain. 3)In addition, the stable transformants can induce the differentiation of cells, and the inactive TCL cells can inhibit the differentiation of cells. 4)Pull Down Assay and Immunoassay to Identify the Presence of TCL Interaction Factors