ヒト・線虫・酵母メタロチオネイン遺伝子における転写制御因子

人类、线虫和酵母金属硫蛋白基因的转录调节因子

基本信息

批准号：
63620510
负责人：
今川正良
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63620510/
关键词：
メタロチオネイン転写因子遺伝子発現プロモーター

项目摘要

遺伝子の発現機構の大部分は転写レベルで制御されている。金属による誘導機構を明らかにする目的でメタロチオネイン(MT)遺伝子を用いて検討を行った。高等動物としてヒトを、下等生物として酵母を材料とした。また進化についても考慮するため、中間に位置する線虫についても検討を加えた。線虫については遺伝子の解析が全くなされていないため、まずcDNAの単離を試みた。カドミウム曝露線虫よりmRVAを抽出し、cDNAライブラリーを作製した。すでに明らかにしている部分アミノ酸配列よりオリゴヌクレオチドを合成しプローブとした。その結果得られたMT-I及びIIのcDNAクローンについて配列を調べたところ、従来から知られている高等動物の配列とはかなり異なっており進化の面から興味深い結果が得られた。現在これらcDNAクローンを用いてMTgenomicクローンを検索中であり、得られ次第プロモーターの解析をする予定である。ヒトMTIIAのプロモーター上にはmetal responsie element(MRE)が存在することをすでに明らかにしているが、この部位に結合する転写因子を検討した。MREを含む合成オリゴヌクレオチドを用いフゲルシフト法を行うと結合タンパク質の存在が示された。しかしこの因子はMRE特異的というようりも、Cに富む配列に親和性を有する可能性があり、SP1、AP2等の詳細な比較が必要と思われる。酵母MTは銅のみによって誘導されるという特長を有している。ゲルシフト法により、酵母MTプロモーター上のMREに特異的に結合するタンパク質の存在を明らかにした。このタンパク質は銅の有無にかかわらず結合活性を有し、銅感受性株にも存在が確認された。すなわちこの転写因子の結合ドメインに銅は必須でなく、転写活性化ドメインに寄与していると推定される。部分精製の結果分子量は32,000と考えられ、このタンパク質の完全精製、クローン化を現在すすめている。

大多数基因表达机制在转录水平上受到调节。使用金属硫蛋白（MT）基因进行研究，以阐明金属诱导的机制。人类被用作较高的动物，酵母被用作下动物。为了考虑进化，我们还考虑了位于中间的线虫。由于未针对线虫进行基因分析，因此首先尝试将cDNA隔离。从暴露于镉的线虫中提取MRVA，并制备cDNA文库。从已经显示并用作探针的部分氨基酸序列中合成了寡核苷酸。检查了MT-I和II的cDNA克隆的序列，结果与常规已知的较高动物的序列显着不同，并且发现在进化方面很有趣。我们目前正在使用这些cDNA克隆搜索MTGENomic克隆，并一旦获得启动子进行分析。以前已经揭示了人类MTIIA的启动子上存在金属责任元件（MRE），但是研究了与该位点结合的转录因子。使用含有MRE的合成寡核苷酸进行了Fugel Shings方法，以显示结合蛋白的存在。但是，即使该因素是MRE特异性的，它也可能对C富序列具有亲和力，并且可能需要进行SP1，AP2等的详细比较。酵母MT的优势是仅由铜诱导。凝胶转移揭示了在酵母MT启动子上特异性结合的蛋白质的存在。该蛋白具有带有或不含铜的结合活性，并且也被证实存在于铜敏感性中。也就是说，假定铜对于该转录因子的结合结构域不是必不可少的，并有助于转录激活域。部分纯化的分子量被认为是32,000，我们目前正在促进该蛋白质的完全纯化和克隆。