ヒト・線虫・酵母メタロチオネイン遺伝子における転写制御因子

人类、线虫和酵母金属硫蛋白基因的转录调节因子

• 批准号: 63620510
• 负责人: 今川 正良
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63620510/
• 关键词: メタロチオネイン; 転写因子; 遺伝子発現; プロモーター

遺伝子の発現機構の大部分は転写レベルで制御されている。金属による誘導機構を明らかにする目的でメタロチオネイン(MT)遺伝子を用いて検討を行った。高等動物としてヒトを、下等生物として酵母を材料とした。また進化についても考慮するため、中間に位置する線虫についても検討を加えた。線虫については遺伝子の解析が全くなされていないため、まずcDNAの単離を試みた。カドミウム曝露線虫よりmRVAを抽出し、cDNAライブラリーを作製した。すでに明らかにしている部分アミノ酸配列よりオリゴヌクレオチドを合成しプローブとした。その結果得られたMT-I及びIIのcDNAクローンについて配列を調べたところ、従来から知られている高等動物の配列とはかなり異なっており進化の面から興味深い結果が得られた。現在これらcDNAクローンを用いてMTgenomicクローンを検索中であり、得られ次第プロモーターの解析をする予定である。ヒトMTIIAのプロモーター上にはmetal responsie element(MRE)が存在することをすでに明らかにしているが、この部位に結合する転写因子を検討した。MREを含む合成オリゴヌクレオチドを用いフゲルシフト法を行うと結合タンパク質の存在が示された。しかしこの因子はMRE特異的というようりも、Cに富む配列に親和性を有する可能性があり、SP1、AP2等の詳細な比較が必要と思われる。酵母MTは銅のみによって誘導されるという特長を有している。ゲルシフト法により、酵母MTプロモーター上のMREに特異的に結合するタンパク質の存在を明らかにした。このタンパク質は銅の有無にかかわらず結合活性を有し、銅感受性株にも存在が確認された。すなわちこの転写因子の結合ドメインに銅は必須でなく、転写活性化ドメインに寄与していると推定される。部分精製の結果分子量は32,000と考えられ、このタンパク質の完全精製、クローン化を現在すすめている。

Most of the development agencies of the virus are in the process of developing new technologies. The purpose of metal induction mechanism is to improve the quality of metal production. The higher the species, the lower the species. The evolution of the line is considered to be in the middle of the line. The analysis of cDNA fragments in the genome of the worm is complete, and cDNA fragments are isolated. Exposed lines are extracted from the cDNA library, and the cDNA library is controlled. In addition, some of the products are available for sale. The result is that MT-I and MT-II cDNA sequences are aligned with each other, and higher animal sequences are aligned with each other. Now, the cDNA library is used in the analysis of MTgenomic information. A metal responsie element(MRE) exists on the top of the MTIIA and is discussed in detail. MRE contains the following information: The factors of MRE specificity, C, and affinity are necessary for detailed comparison. Yeast MT is copper and copper. The existence of a specific binding agent on the MRE of yeast MT is clearly identified. The presence or absence of copper-sensitive plants was confirmed. The combination of the two factors must be determined, and the activation factor must be determined. The molecular weight of the partial purification is 32,000, and the quality of the product is completely purified.