RNAiによるラミニン鎖の会合と分泌を管理する分子群の解析

通过 RNAi 分析控制层粘连蛋白链缔合和分泌的分子

基本信息

批准号：
14037229
负责人：
北川泰雄
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

α1-α5鎖、β1-β4鎖とγ1-γ3鎖が互換的に会合して19種類のαβγ三量体を作るラミニン族は、動物組織構築に寄与する基底膜の主成分である。胚発生の時期と部位に応じた種類のαβγ三量体を合成・分泌するために、ラミニン鎖の細胞内会合と分泌は高度に管理されている。本研究では、我がショウジョウバエ細胞で確率したPNAι法を活用して、この管理に寄与する分子群を網羅的に検索しゅようとした。すなわち、1)ショウジョウバエ体液細胞由来のKc167細胞が大量のラミニンを合成・分泌すること、2)この細胞の培地に二本鎖RNAを添加するだけで標的遺伝子の発現抑制が起こること、3)ショウジョウバエ・ラミニンのα1/5鎖、β鎖及びγ鎖のそれぞれに特異的な抗血清を取得していること、4)ショウジョウバエではゲノムプロジェクトが完了しており、特徴的モチーフをプローブに機能未知の遺伝子をデータベースから検索してRNAiが試せる等の利点を活用して、ショウジョウバエ・ラミニンの合成と分泌機構に標的を絞り、その鎖間会合と分泌制御に関与する遺伝子を網羅的に検索して、それらの機能を解析しようとした。このために、データベースから選択した15種類の候補遺伝子の部分配列を持つ二本鎖RNAを作製し、これを投与したKc167細胞におけるラミニン各鎖の合成、鎖間会合と細胞外分泌を手掛かりにして品質管理に関わる遺伝子を検索した。その結果、チオレドキシン・モチーフ、小胞体内腔輸送シグナル配列及び小胞体内腔残留配列(KDEL)等を持つ5個の遺伝子のRNAiがラミニン分泌を抑制することを発見した。その中には、純正PDIよりも強くラミニ合成に作用する遺伝子が含まれていた。

层粘连蛋白家族，α1-α5链，β1-β4链和γ1-γ3链互换互换以形成19种类型的αβγ三聚体，是基底膜的主要成分，它们有助于动物组织结构。为了根据胚胎发生的时间和位置合成和分泌类型的αβγ三聚体，高度控制了层粘连蛋白链的细胞内关联和分泌。在这项研究中，我们使用了果蝇细胞中随机的PNAι方法来全面寻找有助于该管理的分子。 That is, 1) Kc167 cells derived from Drosophila body fluid cells synthesize and secrete large amounts of laminin, 2) simply adding double-stranded RNA to the cell's medium causes suppression of expression of target genes, 3) antiserum specific for each of the α1/5, β and γ chains of Drosophila laminin, and 4) genome projects have been completed in果蝇和RNAi可用于利用优势，例如使用特征图案作为探针搜索数据库中的未知功能基因，以试用RNAi，针对果蝇层粘连蛋白的合成和分泌机制，全面地搜索涉及基因的基因，以涉及涉及Interstrand Cossiotion Conloction和Sertand Conlotion Conloction和Sertant Control Control和Section Conlotion和Semalion Control和Anally and and and and and and and and and shits and sounts的功能。为此，生成了具有从数据库中选择的15个候选基因的子序列的双链RNA，并使用KC167细胞中每个层粘连蛋白链的综合，链间关联和每个层粘连蛋白链的细胞外分泌搜索参与质量控制的基因。结果，我们发现具有硫氧还蛋白基序的五个基因的RNAi，内质网信号序列，内质网残留序列（KDEL）等。抑制了层粘连蛋白的分泌。这包含比真正的PDI在拉蓝合成中更强烈的基因。