ラミニン複合体の構造と機能の多様性

层粘连蛋白复合物的结构和功能多样性

• 批准号: 01560094
• 负责人: 北川 泰雄
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560094/
• 关键词: ラミニン; 基底膜; 血管内皮細胞; 血管新生; メドロキシプロジェステロン

ラミニンは基底膜に特異的に存在する糖蛋白質でA、B_1、B_2の三種類のサブユニットが十字架状に束ねられた構造をしている。ラミニンは上皮細胞の接着、伸展、増殖、遊走や分化に作用する器官形成の重要因子であり、そのための機能領域を分子構造にちりばめている。我々は3T3-L1繊維芽細胞がサブユニット会合様式ではAと同じ挙動を取るがAよりも小さいA'を発現し、A'B_1B_2という異型ラミニンを発現していることを示した。今回、大動脈と肺動脈から単離した内皮細胞(BAECとCPAE)がAと共にA'も合成し、AB_1B_2とA'B_1B_2を同時に分泌していることを見つけ、これらの相対的量比が血管新生抑制剤で変化することを観察した。これらの成果はラミニン複合体の構造と機能の多様性を血管の修復・新生機構との関連から明らかにしたものである。その要点をまとめると次のようである。BAECとCPAEを放射性アミノ酸で標識し、得られた培地と細胞溶解液を抗ラミニン抗体で免疫沈降して電気泳動に供したところ、培地はA、B_1、B_2に加えてA'を与えた。細胞溶解液は各々のサブユニットごとに糖鎖修飾段階が異なる2種類、合計8本のバンドを与えた。これらの細胞内会合様式を解析したところ、まずB_1B_2複合体が形成された後にAが会合してAB_1B_2複合体が、A'が会合してA'B_1B_1が形成されることが判明した。各々のサブユニットは会合後に一括して細胞内輸送されて糖鎖修飾を受けることも判明した。BAECの通常の培養条件ではA'B_1B_2が主要産物であったが、血管新生抑制効果が知られているメドロキシプロジェステロンを培地に添加するとAの合成が促進されA'の合成が抑制される結果、主要産物はAB_1B_2に転換した。CPAEの主要産物はA'B_1B_2であり、これはメドロキシプロジェステロン添加で変動しなかった。これらの結果は、大動脈を形成しているラミニンはAB_1B_2型であり、血管新生や小動脈形成にはA'B_1B_2型のラミニンが動員されることを示唆した。

层粘连蛋白是一种特异性存在于基底膜中的糖蛋白，具有三种类型的亚基A，B_1和B_2的结构，以横断面的方式捆绑在一起。层粘连蛋白是在细胞的粘附，延伸，增殖，迁移和分化的器官发生的重要因素，为此目的的功能区域散布在分子结构中。我们表明，3T3-L1成纤维细胞的行为与亚基关联模式中的A相同，但表达了一个小于A，表达了一个非典型层粘连蛋白，称为A'b_1b_2。在本文中，我们发现从主动脉和肺动脉中分离出的内皮细胞（BAEC和CPAE）也同时合成了A'''''，分泌AB_1B_2和A'b_1b_2，并观察到这些相对量的比率随抗生物生成的人而变化。这些结果揭示了血管修复与新生成机制之间关系的结构和功能多样性。关键点总结如下：BAEC和CPAE用放射性氨基酸标记，并用抗层蛋白抗体对所得的培养基和细胞裂解物进行免疫沉淀，并进行电泳。将介质给予A，B_1和B_2，并将A添加到介质中。为每个亚基提供了两种类型的细胞裂解物，具有不同的糖基化阶段，总共八个带。分析了这些细胞内关联模式，发现第一个形成，然后是关联的AB_1B_2复合物，并与一个''相关以形成A'b_1b_1。还发现，将每个亚基合成后进行糖基化修饰。在BAEC的正常培养条件下，A'b_1b_2是主要产物，但是当已知抑制血管生成的甲状腺羟孕酮被添加到培养基中时，A的合成并抑制了A的合成，并且将主产物转化为AB_1B_1B_1B_1B_2。 CPAE的主要产品是A'B_1B_2，并未通过添加Medroxyprogesterone来改变。这些结果表明，主动脉层粘连蛋白是AB_1B_2类型，并且A'b_1b_2型层粘连蛋白被募集用于血管生成和小动脉血管内。

项目成果

D.M.Kaetsel,N.Singh,G.C.Kouuedy,J.B.Virgin,G,Farr Y.Kitagawa,J.H.Nilsou,A.M.Tarokolt: "Cowplete and partial glycohrolipid auchors coufewed to Lupro pin β subunit by a C-terminal portion of Thy-1" Proceediugs of National Academy of Sieuce U.S.A.1990.

D.M. Kaetsel、N. Singh、G.C. Kouuedy、J.B. Virgin、G、Farr Y. Kitakawa、J. H. Nilsou、A. M. Tarokolt：“Cowplete 和部分糖脂锚通过 Thy-1 的 C 末端部分与 Lupro pin β 亚基结合” 1990年美国国家科学院院士。

Yasuo KITAGAWA,Yukiko TOKIDA and Yasuaki ARATANI: "Polaritg of epithelium in cell culture systein" Proceedings of the 2nd JAACT Meeting. (1990)

Yasuo KITAGAWA、Yukiko TOKIDA 和 Yasuaki ARATANI：“细胞培养系统中上皮的极化”第二届 JAACT 会议记录。

北川泰雄,三木清史: "形態形成因子としてのレチノイドの機能" ビタミン. (1990)

Yasuo Kitakawa，Kiyoshi Miki：“类维生素A作为形态发生因子的功能”维生素（1990）。

Masaahi ONO,Yasuaki ARATANI,Ikumi KITAGAWA and Yasuo KITAGAWA: "Ascorbic and phosphate stimulates tgpe IV collagen synthesis and accelevates adipose conversion of 3T3-L1 Cells." Eyperiweutal Cell Research. (1990)

Masaahi ONO、Yasuaki ARATANI、Ikumi KITAGAWA 和 Yasuo KITAGAWA：“抗坏血酸和磷酸盐刺激 tgpe IV 胶原蛋白合成并加速 3T3-L1 细胞的脂肪转化。”