血管内皮細胞が発現する2種類のラミニン複合体の構造と機能

血管内皮细胞表达的两类层粘连蛋白复合物的结构和功能

基本信息

批准号：
04263220
负责人：
北川泰雄
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

基底膜は血管内壁を形成している内皮細胞の表裏極性決定、増殖や遊走に作用するだけでなく、外側にある平滑筋細胞との隔壁としても重要である。基底膜の主要糖タンパク質であるラミニンはA、B1とB2鎖が会合した十字架構造をしているが、最近、多様な異型体が発見された。これらには、筋肉膜のメロシン、シナプス基底膜のS-ラミニンや真皮基底膜のカリニンなどがある。我々はこれらが同じ会合機構を共有して「サブユニットすりかえ」によって多様な複合体を作ることを要した。血管内皮細胞ではA鎖に加えてA'鎖が発現され、AB1B2とA'B1B2の2種類の複合体が同時に形成されている。この事実によれば、「内皮細胞は血管新生における脱着、極性喪失、遊走と再接着などの諸過程に応じて異なるラミニンを使い分けている」という仮説が可能である。ラミニン各鎖の会合領域にはheptad repeatがあり、これで形成される疎水性面が鎖間会合力になる。この機構では、会合前の単量体や2量体を可溶状態に保つために分子シャペロンが必要である。このような分子シャペロンをDithiobisSuccinimidyl Pronionate(DSP)処理で細胞内ペプチド間に架橋を形成させる手法で検索したところ、約80、60と50kDのペプチドがラミニン鎖に架橋されていることが判明した。これらのペプチドは以下のような特徴を示した。1)約50kDaのペプチドはHSP47抗体と交差反応を示さない。2)各分子シャペロン様ペプチドとラミニン各鎖間の相互作用の選択性は低い。3)1分子のラミニン鎖に対して多数の分子シャペロン様ペプチドが架橋される。4)モネンシンなどのイオノフォア添加で細胞内小胞のpHを攪乱するとこの相互作用は消失する。

地下膜不仅作用于确定形成血管内壁，增殖和迁移的内皮细胞的极性，而且作为具有外部平滑肌细胞的隔膜也很重要。层粘连蛋白是地下膜中主要的糖蛋白，具有横断结构，其中A，B1和B2链与之相关，但最近发现了各种变体。这些包括肌肉膜中的男素，突触基底膜中的S层蛋白和真皮基底膜中的kalinin。我们要求它们具有相同的关联机制，并通过“亚基逆转”创造出不同的复合物。在血管内皮细胞中，除了A链外还表达了A链，并且同时形成了两种类型的复合物AB1B2和A'B1B2。根据这一事实，可以假设“内皮细胞根据各种过程（例如解吸，极性丧失，迁移和血管生成过程中的重新进化）使用不同的层粘连蛋白。”每个层粘连蛋白链的缔合区域都包含一个重复，并且由此形成的疏水表面变成了链链缔合力。该机制要求分子伴侣在可溶性状态下关联之前保持单体和二聚体。当使用一种方法通过一种方法搜索这种分子伴侣，在这种方法中，通过二硫比斯琥珀酰丙酰亚胺酸酯（DSP）处理形成细胞内肽之间的交联时，发现大约80、60和50 kD的肽是将大约80、60和50 kD肽交联至层蛋白链。这些肽表现出以下特征：1）大约50 kDa肽与HSP47抗体不反应。 2）每个分子伴侣样肽和每个层粘连蛋白链之间相互作用的选择性较低。 3）将许多分子伴侣样肽交联成一个分子的层粘连蛋白链。 4）当细胞内囊泡的pH被添加而添加诸如Monensin等离子囊泡的pH值时，这种相互作用就会消失。