权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

血管内皮細胞が発現する2種類のラミニン複合体の構造と機能

血管内皮细胞表达的两类层粘连蛋白复合物的结构和功能

基本信息

批准号：
03268214
负责人：
北川泰雄
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

動脈内壁を裏打ちしている内皮細胞は外側の基底膜によって極性単層に組織されている。この基底膜は外側の平滑筋細胞の多重層にも作用して血管構造をまとめ上げている。内皮細胞と平滑筋細胞の間に介在する基底膜は、両者の相互作用を知るためにも重要な研究対象である。基底膜の主要糖蛋白質であるラミニンは、細胞機能に特に強く作用することが知られている。EHS腫瘍から多量に精製できる「典型的」ラミニンは、A、B_1とB_2鎖が会合してジスルフィド結合で安定化された十字架状の構造体である。我々は内皮細胞がA,B_1,B_2に加えてA^1を合成し、B_1B_2を共通の前駆体にA B_1B_2とA^1B_1B_2を同時に形成することを示した。また、この2種類のラミニン複合体の合成比が血管新生などの内皮細胞の動的状態に応じて変動することも発見した。本研究ではこれらのラミニンの構造と機能を解明するために、我々が新規に発見したA^1鎖のcDNAクロ-ニングを当面の目標とした。そこで、ウシ大動脈内皮細胞(BAEC)のcDNAライブラリ-を構築し、ラミニンA^1鎖の全長cDNA配列決定をめざして予備実験を重ねた。このために、10^8細胞規模のBAEC培養からポリA^+RNAの調製を重ね、オリゴdTをプライマ-にλZapII中のライブラリ-を構築した。これをラットのA鎖cDNA群をプロ-ブにスクリ-ニングしたが有望なクロ-ンは得られなかった。我々が単離したラットのB_1鎖cDNAはポジティブクロ-ンを与えたので、A鎖とA^1鎖のホモロジ-が低いことが示唆された。また、A鎖類似体であるメロシンのcDNAを入手してプロ-ブとしたが有望なクロ-ンは選択できなかった。そこで、A^1鎖を精製して抗体プロ-ブや合成ヌクレオチド配列の情報を得るためにBAECの大量培養を開始した。現在、ここから得られる粗抽出液をもとにA^1B_1B_2という新しいラミニン複合体の精製法の確立を急いでいる。

The inner wall of the artery is composed of endothelial cells and the outer basement membrane is a polar single layer of tissue. The multiple layers of smooth muscle cells on the outer side of the basement membrane play a role in the vascular structure and the upper layer. The interaction between endothelial cells and smooth muscle cells in the basement membrane and between them is very important and important to study. The main glycoprotein of the basement membrane is strong, and the function of the cell is very strong. EHS tumour, large amount, refined できる "Typical" ラミニンは, A, B_1とB_ 2 locks and combinations are combined and stabilized cross-shaped structures. I 々は endothelial cells がA, B_1, B_2 にえて A^1 を synthesis し, B_1B_2 の front body にA B_1B_2 と A^1B_1B_2 に formed at the same time することを Show した.また, この2 types of のラミニン complex の synthesis ratio が angiogenesis などの endothelial cells の active state に応じて変动すること発见した. This study explains the structure and function of the structure and functions of the system. New rulesに発见したA^1 lockのcDNAクロ-ニングをface-to-faceのtargetとした.そこで、ウシAortic endothelial cells (BAEC) のcDNAライブラリ-をConstructionし、ラミニンA^1 lockのfull-length cDNA arrangement decisionをめざして箟験を重ねた.このために、10^8 cell scale BAEC culture からポリA^+RNA modulationをHeavy ね、オリゴdTをプライマ-にλZapII中のライブラリ-を CONSTRUCTION した.これをラットのA lock cDNA group をプロ-ブにスクリ-ニングしたが好なクロ-ンは得られなかった. My 々が単したラットのB_1 lock cDNA はポジティブクロ-ンをWith えたので, A lock とA^1 lock のホモロジ-がlow いことがshows instigation された.また、A lock similar body であメロシンのcDNAをstarts with してプロ-ブとしたがhopefully なクロ-ンはchoose できなかった.そこで, A^1 lock を purified して antibody プロ-ブや synthesis ヌクレオチド arrangement の information を got るために BAEC の large-scale culture をした. Now, the purification method of the crude extract of the ここからられるをもとにA^1B_1B_2という新しいラミニン complex has been established and the urgent いでいる is established.