脂肪細胞分化における基底膜の機能

基底膜在脂肪细胞分化中的作用

• 批准号: 02660087
• 负责人: 北川 泰雄
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02660087/
• 关键词: 基底膜; IV型コラ-ゲン; ビタミンC; 脂肪細胞; 分化; ラミニン

細胞外マトリックスの一種である基底膜の膜状骨格はIV型コラ-ゲンが形成している。アスコルビン酸がI,III,X型コラ-ゲンの合成,分泌やプロセシンを促進して結合組織を強化することはよく知られていたが,上皮組織のIV型コラ-ゲンに対する作用は研究されていない.今回、脂肪細胞に分化する3T3ーL1におけるIV型コラ-ゲン合成に対するアスコルビン酸リン酸(AscーP)の作用を検討したところ顕著な作用を発見した.その作用は次のようにまとめられる.(1)IV型コラ-ゲンの合成と分泌をともに数十倍に促進した。(2)IV型コラ-ゲンを大きなサイズに変換した.(3)一旦分泌された成熟IV型コラ-ゲンの細胞層への沈着を促進した.このうち、(2)が糖鎖修飾の変化による可能性を検討するために,Nー結合型糖鎖修飾を阻害するツニカマイシンの作用を見たがAscーPのサイズを大きくする効果は消失しなかった.AscーPはIV型コラ-ゲン中のヒドロキシプロリン量を増加させたが,2糖鎖結合部位であるヒドロキシリジン量は増加させなかった.(2)の説明には可変的スプライシングによる新しいIV型コラ-ゲンmRNAの発現も考えなければならない.AscーPの作用はわずかに6時間で観察され,96時間の処理では7μMのAscーPで検出できた.AscーP除去後も、その効果は48時間も残存することも判明した.上記(1)の機構を明らかにするために,AscーPで処理した3T3ーL1細胞の全RNAに対するノ-ザンハイブリダイゼ-ション解析を行ったが,IV型コラ-ゲンmRNAレベルはAscーPで変動しなかった.[ ^<35>S]メチオニンで30分間パルス標識したIV型コラ-ゲンの減衰を追跡したが,AscーPで代謝回転速度は変化しなかった.AscーPによるIV型コラ-ゲン合成の促進によって,3T3ーL1細胞のグリセロリン酸脱水素酵素やリポ蛋白リパ-ゼが早期から発現され,細胞内に大粒の脂肪滴を持つ脂肪細胞が出現することが判明した.

地下膜的膜骨架是一种细胞外基质，由IV型胶原蛋白形成。众所周知，抗坏血酸会促进I，III和X型Colagens的合成，分泌和过程来增强结缔组织，但尚未研究上皮组织对IV型胶原蛋白的影响。在这项研究中，我们研究了抗坏血酸磷酸盐（ASC-P）对3T3-L1中IV型胶原蛋白合成的影响，后者将其区分为脂肪细胞，并发现了显着的作用。效果可以概括如下：（1）IV型胶原蛋白的合成和分泌均通过数十次促进。 （2）将IV型胶原蛋白转换为更大的尺寸。 （3）促进细胞层上曾经分泌成熟的IV型胶原蛋白的沉积。其中（2）用于研究聚糖修饰的变化的可能性，我们观察到抑制N-c-链路的聚糖修饰的衣霉素的作用，但是增加ASC-P大小的效果并没有损失。 ASC-P增加了IV型胶原蛋白中的羟基磷脂的量，但是羟基酯（二糖结合位点）的量并未增加。 （2）的解释是可变的。我们还需要考虑通过价格来考虑新型IV胶原mRNA的表达。仅在6小时时观察到ASC-P的效果，并在96小时时以7μmASC-P检测到。还发现该效应在去除ASC-P后保持了48小时。为了阐明上述（1）的机制，我们对用ASC-P处理的3T3-L1细胞中的总RNA进行了北部杂交分析，但是IV型胶原mRNA的水平与ASC-P不同。我们跟踪了IV型胶原型脉冲标记的衰减30分钟，但通过ASC-P改变了周转率。发现早早表达了3T3-L1细胞中甘油磷酸脱氢酶和脂蛋白脂肪酶，并且细胞内出现脂肪细胞脂肪细胞大。

项目成果

Ono,M.,Aratani,Y.,Kitagawa,I.,and Kitagawa,Y.: "Ascorbic acid phosphate stimulates type IV collagen Systhesis and accelerotes adipose conversion of 3T3ーL1 cells" Experimeutal Cell Research. 187. 309-314 (1990)

Ono, M.、Aratani, Y.、Kitakawa, I. 和 Kitakawa, Y.：“抗坏血酸磷酸盐刺激 IV 型胶原蛋白合成并加速 3T3-L1 细胞的脂肪转化”实验细胞研究 187. 309-314（ 1990)

Kitagawa,Y.,Tokida,and Aratani,Y.(Murakami,H.ed.): "Trends in Animal Cell Culture Technology" Kodansha, 342 (1990)

Kitakawa,Y.、Tokida 和 Aratani,Y.（Murakami,H.ed.）：“动物细胞培养技术的趋势”讲谈社，342（1990）

Kadowaki,T.,and Kitagawa,Y: "Hypoxic depression of mitochondrial mRNA levels in HeLa Cells" Experimental Cell Research. 192. 243-247 (1991)

Kadowaki, T. 和 Kitakawa, Y：“HeLa 细胞中线粒体 mRNA 水平的缺氧抑制”实验细胞研究。

Kaetzel.D.M.,Singh,V.,Kennedy,G.C.,Virgin.J.B.,Farr,G.,Kitagawa,Y.,Nilsou,J.H.and Tatokaff.A: "Complete and partial glycophospholipid Anchors are found on afusion protein cousistings of leuteizing hormore β subunit followed by a carboxylーterminal domzin o

Kaetzel.D.M.、Singh,V.、Kennedy,G.C.、Virgin.J.B.、Farr,G.、Kitakawa,Y.、Nilsou,J.H. 和 Tatokaff.A：“在黄体化激素的融合蛋白上发现了完整和部分糖磷脂锚β 亚基后接羧基末端 domzin o

Fukuoka,S.,Taniguchi,Y.,Kitagawa,Y.,and Schede,G.: "Full leugth cDNA sequence oncoding canine pancreatic colipase" Nucleic Acid Resarch. 18. 5549 (1990)

Fukuoka,S.、Taniguchi,Y.、Kitakawa,Y. 和 Schede,G.：“编码犬胰腺辅脂肪酶的全长 cDNA 序列”核酸研究。