アフリカツメガエルをモデル系とした体軸形成に重要な遺伝子群の網羅的解析

以非洲爪蟾为模型系统综合分析对体轴形成重要的基因

• 批准号: 16011225
• 负责人: 花房 洋
• 金额: $ 3.39万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16011225/
• 关键词: アフリカツメガエル; Organizer; beta-catenin; サブトラクティブスクリーニング; マイクロアレイ; モルフォリノアンチセンスオリゴ

アフリカツメガエル初期胚は背側決定因子beta-cateninの局在から体軸の形成が始まる。我々はbeta-cateninが直接誘導する遺伝子群を同定することで、体軸形成に重要な遺伝子の網羅的なスクリーニングを試みた。具体的には、8〜16細胞期のアフリカツメガエル初期胚の腹側帯域(ventral marginal zone)に野生型beta-catenin mRNA及び機能喪失型beta-catenin mRNAをそれぞれマイクロインジェクションし、zygoticな転写が始まってすぐのステージ(stage 8.5)までインキュベーションする。Stage 8.5胚に達した後、インジェクションした領域を切り出しtotal RNAを回収した。その後total RNAからcDNAプールを作製、プローブ化した後、サブトラクティブスクリーニングを行なった。予備段階の実験からbeta-cateninによって誘導される事が知られている既知の遺伝子Siamois、Chordinなどが単離され、スクリーニングがうまく機能していることが明かとなった。6000クローンのcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、オーガナイザー形成に重要である事が知られている遺伝子がいくつか同定され、それとともに機能の明らかで無い遺伝子もいくつか同定できた。それらの中にはショウジョウバエの初期発生に重要であると考えられている転写因子なども含まれており、現在アフリカツメガエル初期胚を用いて機能を解析中である。これまでXenopusではゲノム解読が遅れていたせいもあり、網羅的にスクリーニングする手段(cDNAマイクロアレイなど)に制約があった。しかし最近cDNAマイクロアレイの利用が可能となり、アフィメトリクス社製GeneChipを用いた解析から約14400転写産物に対し網羅的にスクリーニングを行なった。その結果サブトラクティブスクリーニングで取りこぼしていた遺伝子が多数単離できた。現在これらの遺伝子に関しモルフォリノアンチセンスオリゴをもちいたknockdownアッセイを行なっている。

Youdaoplaceholder0 アフリカ メガエ メガエ in the early stage of embryo, the dorsal determinant beta-catenin <s:1> is located in the が ら body axis <e:1> at the beginning of が. I 々 は beta - catenin が directly induce す る heritage 伝 subgroup を with fixed す る こ と で, body axis formed に important な heritage 伝 son の snare な ス ク リ ー ニ ン グ を try み た. Specific に に, 8-16 cell stage <s:1> アフリカ メガエ メガエ メガエ に ventral marginal zone in the early embryonic stage に wild-type beta-catenin mRNA and び dysfunctional beta-catenin MRNA を そ れ ぞ れ マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン し, zygotic な beginning planning write が ま っ て す ぐ の ス テ ー ジ (8.5) stage ま で イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン す る. After the に of Stage 8.5 embryo reaches た, the を ジェ ジェ ショ ショ <s:1> た た field を is cleaved to produce <s:1> total RNAを and reproduces た た. そ の after total RNA か ら cDNA プ ー ル を system, プ ロ ー ブ change し た, サ ブ ト ラ ク テ ィ ブ ス ク リ ー ニ ン グ を line な っ た. Reserve Duan Jie の be 験 か ら beta - catenin に よ っ て induced さ れ る matter が know ら れ て い る already know の heritage 伝 Siamois, Chordin な ど が 単 from さ れ, ス ク リ ー ニ ン グ が う ま く function し て い る こ と が Ming か と な っ た. 6000 ク ロ ー ン の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し た results, オ ー ガ ナ イ ザ ー form important で に あ る matter が know ら れ て い る posthumous son 伝 が い く つ か with fixed さ れ, そ れ と と も に function の Ming ら か で no traces of い 伝 son も い く つ か with fixed で き た. In そ れ ら の に は シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ の 発 born early に important で あ る と exam え ら れ て い る planning write factor な ど も containing ま れ て お り, now ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル early embryo を with い て function を parsing で あ る. こ れ ま で Xenopus で は ゲ ノ ム solution 読 が 遅 れ て い た せ い も あ り, snare に ス ク リ ー ニ ン グ す る means (cDNA マ イ ク ロ ア レ イ な ど) に restrict が あ っ た. し か し recently cDNA マ イ ク ロ ア レ イ の may use が と な り, ア フ ィ メ ト リ ク ス club system of GeneChip を with い た parsing か ら about 14400 product planning write に し snare of seaborne に ス ク リ ー ニ ン グ を line な っ た. そ の results サ ブ ト ラ ク テ ィ ブ ス ク リ ー ニ ン グ で take り こ ぼ し て い た heritage 伝 son が most 単 from で き た. Now こ れ ら の posthumous son 伝 に masato し モ ル フ ォ リ ノ ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ を も ち い た knockdown ア ッ セ イ を line な っ て い る.