アフリカツメガエルをモデル系とした体軸形成に重要な遺伝子群の網羅的解析

以非洲爪蟾为模型系统综合分析对体轴形成重要的基因

• 批准号: 15011221
• 负责人: 花房 洋
• 金额: $ 2.94万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011221/
• 关键词: アフリカツメガエル; cDNAマイクロアレイ; beta-catenin; 体軸形成; サブトラクティブスクリーニング; マイクロインジェクション

アフリカツメガエル初期胚は背側決定因子beta-cateninの局在から体軸の形成が始まる。我々はbeta-cateninが直接誘導する遺伝子群を同定することで、体軸形成に重要な遺伝子の網羅的なスクリーニングを試みた。具体的には、8〜16細胞期のアフリカツメガエル初期胚の腹側帯域(ventral marginal-zone)に野生型beta-catenin mRNA及び機能喪失型beta-catenin mRNAをそれぞれマイクロインジェクションし、zygoticな転写が始まってすぐのステージ(stage 8.5)までインキュベーションする。Stage8.5胚に達した後、インジェクションした領域を切り出しtotal RNAを回収した。その後total RNAからcDNAプールを作製、プローブ化した後、サブトラクティブスクリーニングを行なった。予備段階の実験からbeta-cateninによって誘導される事が知られている既知の遺伝子Siamois、Chordinなどが単離され、スクリーニングがうまく機能していることが明かとなった。6000クローンのcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、オーガナイザー形成に重要である事が知られている遺伝子がいくつか同定され、それとともに機能の明らかで無い遺伝子もいくつか同定できた。それらの中にはショウジョウバエの初期発生に重要であると考えられている転写因子なども含まれており、現在アフリカツメガエル初期胚を用いて機能を解析中である。これまでXenopusではゲノム解読が遅れていたせいもあり、網羅的にスクリーニングする手段(cDNAマイクロアレイなど)に制約があった。しかし最近cDNAマイクロアレイに強い実績を持つアフィメトリクス社が一万以上のcDNAが搭載されたXenopus Gene Chipを商品化し、ようやく他の種同様網羅的な解析が簡便にできるようになった。現在、cDNAマイクロアレイを利用したより広範なスクリーニグを行なっているところである。

In the early stage of the embryo, the determining factor beta-catenin is formed in the body. Our beta-catenin directly directs the sub-group of subscribers to determine the identity of the subscriber subgroup, and to form an attempt to identify the key subscriber sub-networks. Specific cell cycle, 8-16-year-old cell cycle (ventral marginal-zone). Wild-type beta-catenin mRNA and machine-energy-lost beta-catenin mRNA were detected in the early stage of the disease. The results showed that there was no significant difference between the two groups (stage 8.5). The results showed that there was a significant increase in the number of patients in the early stage of pregnancy. After the Stage8.5 embryo has been treated, the field has been cut out and the total RNA has been returned. After the total RNA, the cDNA, the operation, the operation, the treatment, the operation, the operation and the operation. You need to know that you know that you know that your Siamois, Chordin, and Chordin are isolated, and that your machine is able to tell you how to do it. 6000. You need to know that it is important for you to know that you have the same license, and that you are able to verify that you are not responsible for the same agreement. 6000. You need to know that it is important to know that you are not responsible for each other. In the early stage of pregnancy, there are many important problems in the early stage of life. In the early stage of pregnancy, there are many important problems in the early stage of pregnancy. In the early stage of pregnancy, there is a problem in the early stage of pregnancy. This is the most important thing for you to do. You need to know how to do this. You need to know how to do this. You need to know how to do it. You need to know how to do it. In recent years, cDNA has announced that it is necessary to support the purchase of more than 10,000 cDNA, commercial Xenopus Gene Chip, and other networks of the same network. At present, cDNA is in the process of making use of the information in the market.