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SAGEライブラリーに基づいた新規消化管癌特異遺伝子の抽出と個性診断への応用

基于SAGE文库的新型胃肠癌特异性基因的提取及其在人格诊断中的应用

基本信息

批准号：
17015031
负责人：
安井弥
金额：
$ 5.25万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17015031/
关键词：
消化管癌 SAGEライブラリー個性診断 ELISA REGIV MIA MMP-10 カスタムアレイ

项目摘要

SAGEライブラリーの比較から新しい癌特異的遺伝子を抽出し、標的治療を視野に入れた消化管癌の診断系を確立することを目的として以下のとおり実施した。1)消化管癌と正常臓器のSAGEライブラリーの比較による新規癌特異的遺伝子の抽出:我々の胃癌SAGEライブラリー(GEO accession no.GSE545)と主要14臓器(心臓、肺、肝臓、脳など)のそれとの比較および定量的RT-PCR法により、APIN,TRAG3,CYP2W1,MIA,MMP-10,DKK4,GW112,REGIV,HORMAD1の9遺伝子が胃癌特異的であることを見い出した。食道扁平上皮癌についてSAGEライブラリーを作成し、正常食道のそれと比較して発現の異なる遺伝子群を抽出した。2)Recombinant蛋白の調整、抗体作成およびELISA系の構築:抗体の入手可能であったMIA,DKK4,MMP-10および独自にポリクローナル抗体を作成したREGIVでは、免疫染色およびELISAを行い、MIAとMMP-10の組織内発現が悪性度と相関すること、REGIVとMMP-10がよい血清マーカーであることを見い出した。他の遺伝子については順次recombinant蛋白の調整、モノクローナル抗体の作成を行い、特異性を確認中である。3)新規癌特異的発現遺伝子の機能解析:REGIVの胃癌細胞株強制発現系で、5-FUによるアポトーシスの抑制を明らかにした。さらに、数種の細胞質内および核内蛋白と相互作用を示すことを見い出すとともに、動物モデル系において腹膜播種を促進することを明らかにした。4)SAGEライブラリーに基づいたカスタムオリゴDNAアレイの作成とそれによる検索:上記で抽出した癌特異的発現遺伝子を加えた約200遺伝子を搭載する三次元カスタムアレイを新たに作成し、約20症例の胃癌を解析し臨床病理学的事項との検討を行った。

The comparison of SAGE radioblaserry aims to extract new cancer-specific genes and establish a diagnostic system for digestive tract cancer in the field of targeted therapies. 1)Comparison of SAGE classification between digestive tract cancer and normal organs: extraction of cancer-specific genes: gastric cancer SAGE classification (GEO accession no.GSE545) and comparison of quantitative RT-PCR of 14 major organs (heart, lung, liver, kidney), APIN, TRAG3, CYP2W1,MIA,MMP-10, DKK4,GW112,REGIV, HORMAD1 and 9 genes specific to gastric cancer. Esophageal squamous cell carcinoma was diagnosed by SAGE, and normal esophageal carcinoma was diagnosed by SAGE. 2)Recombinant protein regulation, antibody production and ELISA system construction: Antibody preparation may include MIA,DKK4,MMP-10 and independent antibody production. REGIV, immunostaining and ELISA, MIA and MMP-10 in tissue expression, correlation, REGIV and MMP-10 in serum. The sequence of recombinant protein regulation, antibody production and specificity confirmation are in progress. 3)Functional analysis of new cancer-specific gene:REGIV stress development line of gastric cancer cell line, 5-FU inhibition of tumor growth In addition, several cytoplasmic and nuclear protein interactions have been shown to be beneficial to the development of animal models. 4)SAGE DNA DNA analysis and development: The above cancer-specific gene was extracted, and about 200 genes were added. About 20 cases of gastric cancer were analyzed, and clinical pathology was discussed.