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高等動物の染色体バンド境界領域の核内配置とその動態

高等动物染色体带边界区域的核排列和动力学

基本信息

批准号：
08274221
负责人：
池村淑道
金额：
$ 1.15万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高等動物染色体の高度に組織化された核内配置を決定する情報は,基本的には塩基配列に担われると考えられる.セントロメアおよびテロメアが,重要な役割をはたすことは明らかであるが,染色体バンド境界も重要な部位と想定している.ヒトMHC領域内に,複製タイミングのスイッチ点としてバンド境界を正確に特定でき,SARの存在および複数の特徴的な配列類を見いだした.間期核内配置を決める分子機構としては,DNA配列に特異的に親和性を示す核内構造の存在が想定される.生理条件下でこのような活性を示す分子レベルでの構造体としては,単鎖及び3重鎖のような非ワトソン・クリック型構造を形成するDNA部位や,RNAや,配列特異性のあるDNA結合タンパク質,及びこれらの複合体が考えられる.バンド境界領域にも,これらの活性と関係する配列類が存在していた.生理条件下で,配列特異的にDNAに高親和性を示す核内構造体を探索する目的で,バンド境界領域に見出されたtriやtetraヌクレオチドの反復配列およびPABL,ならびにテロメアとαサテライト反復配列を蛍光プローブとして,ヒトの培養生細胞へのlipofectionによる導入実験と,未変性間期核に対するin situ結合実験を行った.いずれの方法でも,配列特異的に特徴的なfoci状の結合像が得られた.PABLプローブはテロメア近傍に強い結合を示したが,RNase処理核ではこの結合シグナルは消失する。PABL由来のRNAがテロメア近傍に局在することが示唆される。トリヌクレオチドリピート配列である(CTG/CAG)nや(GAA/TTC)nは,non-B型形成能を持つことが知られているが,配列特異的にfoci状の結合像を与える。単鎖特異的ヌクレアーゼに感受性であるので,non-B型DNAから構成される構造が結合に重要と考えている。核内には,non-B型構造がfoci状に存在しており,RNAやDNAへの配列特異的なたんぱく質とも複合体をなし,配列特異的に高親和性を示す部位を形成し,染色体上で離れた位置にあるDNA間での特異的な結合を可能にし,DNAの高度な組織化を実現しているとのモデルを考えている。

The highly organized arrangement of chromosomes in higher animals determines information about the basic arrangement of chromosomes. The most important part of the chromosome is the chromosome. Within the MHC domain, the presence of SAR and the alignment of multiple characteristics are identified in the correct domain. DNA alignment specific affinity indicates the existence of a desired nuclear structure. Under physiological conditions, this activity is demonstrated by the formation of DNA sites,RNA sites, alignment specificities, DNA binding proteins, and DNA complexes in molecular structures that are single-and triple-locked. In the domain of the domain, the activity of the domain is related to the existence of a set of classes. Under physiological conditions, alignment specific DNA shows high affinity for intra-nuclear constructs. For the purpose of exploring intra-nuclear constructs, we have found that tri-tetrad DNA repeats alignment and PABL in various domains, and that tri-tetrad DNA repeats alignment and lipofection in cultured cells are introduced into the system. In the method, the foci-like binding image of the specific characteristics was obtained.PABL was used to show the strong binding in the vicinity, and RNase treatment was used to eliminate the binding pattern. PABL is derived from RNA that is closely related to the site. (CTG/CAG)n (GAA/TTC) n,non-B type formation energy The structure of the non-B-type DNA is important in the study of the sensitivity of the specific DNA. In the nucleus,non-B-type structures exist like foci,RNA and DNA sequence-specific complexes are formed, sequence-specific high-affinity sites are formed, specific DNA binding is possible at discrete positions on chromosomes, and DNA is highly organized.