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核酸界面活性剤と脂質ナノベシクルを用いたプローブ分子細胞内送達システムの創製

使用核酸表面活性剂和脂质纳米囊泡创建探针分子的细胞内递送系统

基本信息

批准号：
19021036
负责人：
後藤雅宏
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、任意の配列・長さを持ったDNAを容易に合成・修飾することが可能となり、DNAは遺伝子以外の機能を持った'ナノ構造体制御素子'として注目されている。本研究では、相補的なDNAを膜表面に組み込んだリポソームを調製し、DNAの特異的な二本鎖形成能を利用して、秩序性を持った会合体の形成-崩壊の制御について検討した。さらに、形成させた会合体を融合させることによる遺伝子導入キャリアの可能性についても議論した。相補的な24mer DNA界面活性剤を挿入したそれぞれのリポソームを混合し、室温で静置した結果、凝集体が形成された。この凝集体をTEM観察した結果、調製した200nmサイズのリポソームが集まって形成されていることが確認できた。リポソームにDNAを組み込むことにより、リポソームの会合体を形成できることが示された。DNA界面活性剤を挿入したリポソームで会合体を形成した後、繰り返し昇温(70℃)、降温(30℃)させ、濁度変化を田により測定した。その結果、昇温、降温によって、DNAの解離・結合に基づく、会合体の形成・崩壊が制御可能であることが明らかとなった。リポソームDNA複合体調製時の緩衝液濃度を2mMに下げ、会合体形成に及ぼす塩強度の効果を検討した。DNAの結合を促進させるため、MgCl_2を10mM添加した結果、極短時間で濁度の上昇が確認された。DNAにより、リポソーム会合体を形成させる場合、塩強度が高いほどDNAのハイブリダイゼーションが促進され、リポソームが会合しやすいことが示された。形成された会合体はDNAの解離温度によって崩壊、再形成を繰り返し行うことが出来る、つまり、温度可逆性を有していることが示された。また、用いるDNAの鎖長により、マイクロサイズの会合体形成や会合体から融合体への形態誘導力河能となり、プローブ送達キャリアとしての可能性を示すことができた。

In recent years, arbitrary の match column, long さを hold ったを easy に DNA synthesis, modification することが may となり, DNA は heritage 伝 child outside の function を hold った 'ナノ tectonic regime imperial element child' として attention されている. This study では, phase of な DNA を membrane surface に group み込んだリポソームを modulation し, DNA の formation specific な 2 lock can を using して, bottom を hold った will fit の form - avalanche 壊の suppression について beg し検た. さらに, forming させた will fit を fusion させることによる posthumous son 伝 import キャリアの possibility についても comment した. Interface active phase of 24 killing な DNA tonic を scions into したそれぞれのリポソームを mixed し, room temperature で let stand した results, collective が form された. この coagulation collective を TEM 観 examine した results, modulation した 200 nm サイズのリポソームが set まって form されていることが confirm できた. リポソームに DNA を group み込むことにより, リポソームの will fit を form できることが shown された. DNA interface active tonic を scions into したリポソームで will fit を form した, Qiao り return し temperature (70 ℃), temperature (30 ℃) させ, turbidity - を field により determination した. その results, heating, cooling によって, DNA の dissociation, combining に base づく, will fit の formation collapse 壊が suppression may であることが Ming らかとなった. リポソーム DNA complex modulation をの buffer concentration at the time of 2 mm にげ, will form に and ぼす salt strength の unseen fruit を beg し検た. DNA の combining を promote させるため, MgCl_2 を 10 mm add した results, a very short time で turbidity rising のが confirm された. DNA により, リポソーム will fit を form させる occasions, high intensity of salt がいほど DNA のハイブリダイゼーションが promote され, リポソーム meet がしやすいことが shown された. Form された will fit はの DNA dissociation temperature によって壊 alert, and forming を Qiao り return line しうことがる, つまり, temperature reversible をしていることが shown された. また, use いる DNA の lock long により, マイクロサイズの will form や will fit から fusion への river morphology induced force can となり, プローブ served キャリアとしてをの possibility in すことができた.