マラリア原虫人工染色体を用いた新実験システムの開発

利用疟原虫人工染色体开发新的实验系统

• 批准号: 19041048
• 负责人: 岩永 史朗
• 金额: $ 4.93万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19041048/
• 关键词: マラリア原虫; 人工染色体; 遺伝子ライブラリー; レポーターアッセイ

申請者は既にネズミマラリア原虫(P.berghei)人工染色体を作製し、昨年度これを用いた新規レポーターアッセイシステムの開発に成功している。本年度はこれを用いて、マラリア原虫-人工染色体を宿主-ベクター系とした遺伝子ライブラリーを作製し、薬剤耐性遺伝子同定のためのパイロット実験を行った。まず、既知の遺伝子座に人工的に薬剤耐性遺伝子を組込んだネズミマラリア原虫を作製し、これよりゲノムDNAを抽出した。次にゲノムDNAを制限酵素消化後、アガロースゲル電気泳動し、薬剤耐性遺伝子が含まれると考えられるDNA断片を含むインサートDNAを調製した。続いてインサートDNAを人工染色体にライゲーションし、その後、エレクトロポレーション方により、原虫へ直接導入した。導入後、直ちに原虫をラットに接種し、その後、薬剤処理を行って、薬剤耐性遺伝子を含む人工染色体が導入された原虫のみをスクリーニングにより選択した。2回の試行を行った結果、いずれにおいても薬剤耐性原虫を選択することができ、また、選択された原虫内には薬剤耐性遺伝子が導入された人工染色体が導入されていることを確認した。以上の結果より、本実験系により、マラリア原虫-人工染色体を用いた遺伝子ライブラリーによって確実に薬剤耐性遺伝子をスクリーニングすることができることが示され、新たな実験法の開発に成功した。

The applicant has successfully developed the artificial chromosome system for P. berghei. This year, we will conduct research on the use of protozoa and artificial chromosomes, and on the control of gene expression and gene tolerance. The gene expression of a known gene is called a resistance gene, and the gene expression of a known gene is called a resistance gene. The next step is to restrict the DNA from digestion, digestion, electromigration, and resistance to DNA fragments. The artificial chromosome is introduced directly into the genome. After introduction, the protozoa is inoculated, and the protozoa is inoculated. 2. The results of the trial were as follows: These results indicate that the development of a novel method for the identification of resistant protozoa is successful.

项目成果

Plasmodium bergheiの人工染色体の開発

伯氏疟原虫人工染色体的研制

• 发表时间: 2008
• 作者: Feng;G・T;Kodama・X;Chen・K;Okada・T;Honda;Iriko H;Tsuboi T;Yano K;Mudeppa DG;Ghoneim A;Han ET;Tsuboi T;Tsuboi T;S. Iwanaga;岩永史朗
• 通讯作者: 岩永史朗

Plasmodium bergheiへの新規遺伝子導入法の開発

伯氏疟原虫基因导入新方法的开发

• 发表时间: 2007
• 作者: Feng;G・T;Kodama・X;Chen・K;Okada・T;Honda;Iriko H;Tsuboi T;Yano K;Mudeppa DG;Ghoneim A;Han ET;Tsuboi T;Tsuboi T;S. Iwanaga;岩永史朗;岩永史朗
• 通讯作者: 岩永史朗

マラリア原虫人工染色体

疟原虫人工染色体

• 发表时间: 2009

Functional identification of the (syntenic) conserved centromere of Plasmodium

疟原虫（同线）保守着丝粒的功能鉴定

• 发表时间: 2008
• 作者: Feng;G・T;Kodama・X;Chen・K;Okada・T;Honda;Iriko H;Tsuboi T;Yano K;Mudeppa DG;Ghoneim A;Han ET;Tsuboi T;Tsuboi T;S. Iwanaga
• 通讯作者: S. Iwanaga