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C型肝炎ウイルス持続感染マウスの作製と発がん機構の解明

丙型肝炎病毒持续感染小鼠的产生及其致癌机制的阐明

基本信息

批准号：
20012023
负责人：
三浦直行
金额：
$ 6.78万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

Alb-uPA免疫不全マウスは常時10匹を維持している。このマウスの雌雄を交配すると4分の1にAlb-uPAをホモにもつ子マウスができる。生後3週のホモマウスにDsRed2遺伝子で肝細胞を赤くマークしたマウス肝臓から初代肝細胞を調製し、Alb-uPAホモマウス脾臓に5×10^5個の肝細胞を移植した。4週後に肝臓を観察したところ、約半分が赤色にマークされた肝細胞に置換されていた。この結果に基づき、ヒト肝細胞を5×105^個ホモマウス脾臓に移植したところ、4週後にヒト肝細胞がかなりの領域を占めていることが確認できた。前年度に、ヒトSR-BI(scavenger receptor class B type I),CD81, claudin-1を肝細胞特異的に発現するトランスジェニックマウスを作製した(6系統)。肝細胞抽出液を用いたウエスタンブロット法により、ヒトSR-BI, CD81, claudin-1の3蛋白が発現をしているマウスが2系統いることが判明した。今年度は、C型肝炎ウイルス(HCV)の感染にはoccludin蛋白も重要であるという報告(Nature 457:882-886,2009)に基づき、ヒトoccludin蛋白を肝細胞特異的に発現しているトランスジェニックマウスを作製した。5系統中2系統にヒトoccludin蛋白の発現を認めた。そこで、ヒトCD81, SR-BI, claudin-1発現マウスとヒトoccludin発現マウスを交配し、4つのヒト蛋白を発現しているマウスを得た。このマウス肝臓切片に大腸菌で産生したHCVのE2蛋白の結合を確認した。野生型肝臓切片では、E2蛋白は結合しないが、4つのヒト蛋白を発現したマウス肝臓切片へはE2蛋白が結合した。現在、患者血清中のHCVをこの4蛋白発現マウスに注射し、感染がおこるかどうかの判定を行なおうとしている。

Alb-uPA immunity is not complete, but it can be maintained for 10 minutes. The female and male are mated in 4 minutes. 3 weeks after birth, 5×10^5 hepatocytes were transplanted. 4 weeks later, the liver cells were replaced by the liver cells. The results showed that 5×105 hepatocytes were transplanted and confirmed after 4 weeks. In the previous year, SR-BI(scavenger receptor class B type I), CD81, claudin-1 were detected in hepatocytes (6 systems). The expression of SR-BI, CD81, claudin-1 and 3 proteins in hepatocyte extract was identified by the method of " This year's report (Nature 457:882- 886, 2009) on the importance of occludin protein in hepatitis C virus (HCV) infection shows that occludin protein is a hepatocyte-specific protein that can be detected and controlled. 2 out of 5 system occludin protein discovery CD81, SR-BI, claudin-1 is found to be the most common form of protein. Identification of HCV E2 protein binding in E. coli wild-type liver slices were found to bind to E2 protein, and 4 to E2 protein. Now, HCV protein 4 in the patient's serum is detected, and the infection is determined.