カンジダ酵母における病原性ゲノム機能学(網羅的遺伝子発現制御株の構築と応用)

念珠菌致病基因组功能（综合基因表达调控菌株的构建与应用）

• 批准号: 20018003
• 负责人: 知花 博治
• 金额: $ 7.42万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20018003/
• 关键词: ゲノム創薬; 病原性メカニズム; 分子標的; 日和見感染; 深在性真菌症

カンジダ(Candida)をはじめとする病原真菌の中には、重篤な日和見感染の原因菌が存在する。しかし、病原性には複数の因子が関与し病原性を呈していると考えられており、未解明な点が多い。治療の第一選択は抗真菌薬が処方されるが、既存の抗真菌薬においては選択毒性や耐性菌の問題が存在する。C.glabrataは、病原真菌の中で遺伝子操作が最も容易であり網羅的機能解析に最適であるので、我々はC.glabrata病原真菌のモデル生物と位置づけゲノムワイドな遺伝子機能解析を進めることにより病原性の普遍性を追求することを最終目標としCandida glabrataのフェノームプロジェクト(網羅的遺伝子機能解析)を推進している。本計画ではC.glabrataのゲノム(5,300遺伝子)の中で、必須遺伝子に対してテトラサイクリン転写抑制株(Tet株)を、非必須遺伝子に対してはノックアウト株を体系的に構築し、これらの組み換え株を用いて様々な条件下での培養やそれに伴う発現解析、マウスへの感染実験など通して表現型解析を進めた。1)KU80ノックダウンシステムを用いたKO株(遺伝子欠損株)の作製を約300遺伝子について実施した。2)網羅的なcDNA5'解析による新規遺伝子の探索と同定:前年度、次世代シークエンサーを用いたcDNA解析を行い、遺伝子の未同定領域に転写開始点がみられる46サイトを見出した。これらの転写開始点に改訂、テトラサイクリン転写抑制プロモーターを導入しTet株を構築し、生育実験を行った。その結果、生育遅延あるいは生育停止の株が26種類見出された。このことから、生育においてこれらの遺伝子が何らかの機能を持つことが示唆された。すなわち26種類の新規遺伝子候補を選出することができた。

Youdaoplaceholder0 ジダ ジダ(Candida)を を じめとする じめとする in the pathogen pathogen, に な, and the pathogen causing the infection, な, are present at する. The relationship between the plural of the <s:1> factor が and the pathogenic factor に and the pathogenic factor を and the pathogenic factor of the pathogen を is <s:1> て ると ると えられてお and the unexplained な points are が many が. Treatment の first sentaku は antifungal 薬 が 処 party さ れ る が, existing の antifungal 薬 に お い て は sentaku toxicity や resistant bacterium の が existence す る. C.g labrata は, pathogenic fungi in の で heritage 伝 sub operations が も most easily で あ analytical に り snare the function of the optimal で あ る の で, 々 I be sad labrata chtistina georgina rossetti.british poetess は pathogenic fungi の モ デ ル biological と position づ け ゲ ノ ム ワ イ ド な heritage 伝 sub function analytical を into め る こ と に よ り pathogenicity の universality を pursuit す る こ と を ultimate goal と し Candida glabrata フェノ フェノ ムプロジェ ト ト ト(analysis of the function of the 伝 subunit of the snare)を propulsion て る る. This project で be sad labrata chtistina georgina rossetti.british poetess は の ゲ ノ ム (5300 legacy 伝) in の で, must have 伝 に し seaborne て テ ト ラ サ イ ク リ ン planning write inhibit plant (Tet) strains を, must not have 伝 に し seaborne て は ノ ッ ク ア ウ ト plant に を system constructing し, こ れ ら み の group in え を strains with い て others 々 な conditions で の cultivate や そ れ に with う 発 Now, the analysis of the <s:1> infection experiment な is conducted through the analysis of the <s:1> phenotype を into めた. 1) KU80 ノ ッ ク ダ ウ ン シ ス テ ム を with い た KO strains の (but 伝 son owe damage strain) for about 300 legacy system を 伝 son に つ い て be applied し た. 2) net な cDNA5 'parse に よ る new rules but 伝 son の explore と with: before the annual, next generation シ ー ク エ ン サ ー を with い た cDNA parsing line を い, but 伝 の に failed with field planning write starting point が み ら れ る 46 サ イ ト を shows し た. こ れ ら の planning write に could order to the starting point, テ ト ラ サ イ ク リ ン planning write inhibit プ ロ モ ー タ ー を import し Tet を build し strains, birth be 験 を line っ た. Youdaoplaceholder0 そ result, reproduction 遅 prolongation ある そ prolongation cessation が strain が26 species are shown in された. こ の こ と か ら, birth に お い て こ れ ら の heritage 伝 child what が ら か の function を hold つ こ と が in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0 26 types are subject to the new regulations, and the 伝 sub-candidate を is selected from する する とがで とがで た た た た.

项目成果

カンジダフェノームプロジェクトにおける網羅的遺伝子組み換え株の構築

念珠菌表型组计划综合转基因菌株的构建

• 发表时间: 2008
• 作者: 知花博治;上野圭吾;笹本要;木下智妻子;三谷宏樹;小暮高久;加藤直子;宇野潤;青山俊弘;中山浩伸;三上裏
• 通讯作者: 三上裏

Target validation and ligand development for a pathogenic fungal profilin, using a knock-down strain of pathogenic yeast Candida glabrata and structure-based ligand design

使用致病性酵母光滑念珠菌的击倒菌株和基于结构的配体设计，对致病性真菌 profilin 进行靶标验证和配体开发

• 发表时间: 2010
• 期刊: Yeast online
• 作者: Ueno K;Tamura Y;Chibana H.
• 通讯作者: Chibana H.

Genotyping of Candida albicans by fragment analysis of microsatellites combined with 25S rDNA and RPS-based strategies.

• DOI: 10.3314/jjmm.50.167
• 发表时间: 2009-01-01
• 期刊: Nihon Ishinkin Gakkai zasshi = Japanese journal of medical mycology
• 作者: Adachi, Hidesada;Shimizu, Kazue;Kanbe, Toshio
• 通讯作者: Kanbe, Toshio

The enigma of the major repeat sequence of Candida albicans

• DOI: 10.2217/17460913.4.2.171
• 发表时间: 2009-03-01
• 期刊: FUTURE MICROBIOLOGY
• 影响因子: 3.1
• 作者: Chibana, Hiroji;Magee, Paul T.
• 通讯作者: Magee, Paul T.

Integration of functional genomics in pathogenic fungus Candida glabrata and development of antifungal drug targets

病原真菌光滑念珠菌功能基因组学整合及抗真菌药物靶点开发

• 发表时间: 2009
• 作者: 長環;青山俊弘;豊田美香;中山浩伸;知花博治;上西秀則;Richard A Calderon;Hiroji Chibana
• 通讯作者: Hiroji Chibana